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[求助]
求助】哪位大侠做过原代细胞提取，用percoll分离的？小弟不得技术要领啊！急求帮助啊
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最近在提取雏鸭的原代肝细胞，用的体内灌流法，先用肝素钠冲血，再用胶原酶IV消化，然后取下肝脏，剪碎，加培养基，500rpm离心，3min。离两次后，再用percoll分离。查的方法是：1、percoll原液1.131的，然后0.1MPBS 1:9稀释成分离液I，2、再与0.01M PBS以7:3配比，4000rpm先离心，得分离液II 3、缓慢加入细胞悬液，4000rpm分离3min。不知为啥，我做的总是不分层，总是集中在培养基和percoll之间，显微镜下就是图上这种，有细胞，但好多杂质。 请问大神，这些杂质是什么东西啊？细胞碎片吗？ 还有我的PBS是自己配的，也是一些通用的配方，感觉没什么问题。 有做过percoll分离细胞的大神，告知一下percoll分离细胞的要点啊。我查的是分离液II配好后要先离心，再加细胞离心，这样合理吗？我也试过直接离心细胞，还是不行呢。 感激不尽感激不尽！！  无percoll-2.jpg |
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