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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » BiFC 烟草瞬时表达 阴性对照的萤光信号强于实验组
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qingfeng2011

金虫 (正式写手)

[求助] BiFC 烟草瞬时表达 阴性对照的萤光信号强于实验组 已有1人参与

本人最近在用BiFC的方法验证两个蛋白的互作，载体是pSPYNER173 和pSPYCEMR, 农杆菌摇到OD600=0.6~1左右后将A-CEMR 和B-NER载体及P19按5：5：3的比例混合，最终悬浮液的OD值为1。阴性对照为A-CEMR+NER 和CEMR+B-NER。注射烟草叶片后24h开始观察，阴性对照就已经有很强的信号了，而实验组在48h时都没那么强。为此很是困惑，阴性对照不应该有荧光的，为什么我做的信号会那么强呢？

求高手指点迷津，本人将不胜感激！
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1楼 2016-01-06 20:03:01
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自得其乐001

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lmzheng66 at 2016-01-06 23:47:03
将两个空载体转化农杆菌，再注射本氏烟，看看是否有荧光表达，如果有荧光，不能用做做BIFC，本人有gateway的BIFC载体。如有需要，可交换使用。

你好，我们也有gateway的bifc载体一套，你们是psite系列吗？我们的载体好像不工作，做了几个月了，可以请教一些问题吗

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11楼2017-09-20 00:16:59
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xufengnbu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒载体上启动子后面有gfp？

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why is the way to success
2楼2016-01-06 23:41:54
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lmzheng66

银虫 (正式写手)
将两个空载体转化农杆菌，再注射本氏烟，看看是否有荧光表达，如果有荧光，不能用做做BIFC，本人有gateway的BIFC载体。如有需要，可交换使用。

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3楼2016-01-06 23:47:03
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qingfeng2011

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xufengnbu at 2016-01-06 23:41:54
质粒载体上启动子后面有gfp？

是的，35S启动子

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4楼2016-01-07 18:57:07
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