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普雅2015

新虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌的转染 已有1人参与

从-70℃冰箱中取200μl 感受态细胞悬液,室温下使其解冻,解冻后立即置冰上。
2、 加入pBS 质粒DNA 溶液(含量不超过50ng,体积不超过10μl),轻轻摇匀,冰上放置30 分钟后。
3、42℃水浴中热击90 秒或37℃水浴5 分钟,热击后迅速置于冰上冷却3-5 分钟。
4、向管中加入1ml LB 液体培养基(不含Amp),混匀后37℃振荡培养1 小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Ampr )。
5、将上述菌液摇匀后取100μl 涂布于含Amp 的筛选平板上,正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养16-24 小时
各个步骤的目的是什么?

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杨仔儿

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
2,感受态的细胞膜通透性大,冰浴让质粒进去大肠杆菌
3,水浴是为了使通透性减小,不让质粒出来
4,摇床使菌体对数生长
5,挑单克隆,使接下来的菌只是一个菌,纯化作用

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2楼2016-01-06 10:40:13
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