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[求助]
求助重叠延伸pcr
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本人最近在p一个基因的启动子，长度2595，分成了两段，分别是1285和1422，中间有100个bp的重叠，从基因组上把两个片段扩下来的时候用的是hifi，进一步扩增的时候用的是fastpfu，两个片段扩下来之后加上引物pcr连接的时候一直连不上，不加引物虽然可以连上，但是条带很弱，用回收的目的条带扩增的时候，第一次用hifi，退火温度60的时候可以扩出来，第二次同样的条件就不行了，求各位大侠解惑 发自小木虫Android客户端 |
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