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折光暗影

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助重叠延伸pcr

本人最近在p一个基因的启动子,长度2595,分成了两段,分别是1285和1422,中间有100个bp的重叠,从基因组上把两个片段扩下来的时候用的是hifi,进一步扩增的时候用的是fastpfu,两个片段扩下来之后加上引物pcr连接的时候一直连不上,不加引物虽然可以连上,但是条带很弱,用回收的目的条带扩增的时候,第一次用hifi,退火温度60的时候可以扩出来,第二次同样的条件就不行了,求各位大侠解惑

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