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gengxin60
祝福
61楼2016-01-05 08:07:32
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yang2325182

金虫 (正式写手)
一个求助帖到现在回复最多的是五个字。。。木虫真的没有人会来细心帮忙解释吗？哪怕交流下也可以啊。。
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o(╯□╰)o
62楼2016-01-05 13:03:53
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纳米之心

木虫 (文坛精英)
祝福楼主
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火星人要回火星了！！！
63楼2016-01-05 13:37:50
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Joyce-Cheng

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的米氏常数是在酶的最佳PH条件下测的吗，测米氏常数要在最佳PH条件下才能测吗，求指教
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64楼2016-01-28 14:39:04
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琉璃月028

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我现在也做酶固载，我用的是脂肪酶，酶活是通过水解三丁酸甘油酯，氢氧化钠滴定来确定，的到酶活。但是测得自由酶活和买的酶的上标的活性差很多。
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65楼2016-08-08 14:11:16
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yang2325182

金虫 (正式写手)
引用回帖:
65楼: Originally posted by 琉璃月028 at 2016-08-08 14:11:16
我现在也做酶固载，我用的是脂肪酶，酶活是通过水解三丁酸甘油酯，氢氧化钠滴定来确定，的到酶活。但是测得自由酶活和买的酶的上标的活性差很多。

脂肪酶好像很多人做过，是一个很好的例子。我做的时候的因为酶可能对温度比较敏感，所以最后结果没有脂肪酶的好。
再者，酶活定义真的只是自己定义的。。。我觉得参考意义不大吧。
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o(╯□╰)o
66楼2016-08-09 23:22:55
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琉璃月028

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
66楼: Originally posted by yang2325182 at 2016-08-09 23:22:55
脂肪酶好像很多人做过，是一个很好的例子。我做的时候的因为酶可能对温度比较敏感，所以最后结果没有脂肪酶的好。
再者，酶活定义真的只是自己定义的。。。我觉得参考意义不大吧。...

借此机会再请教您几个问题吧，在做固载酶的时候，我看文章会将固载酶的活性与自由酶的活性进行比较。我一直比较迷茫的是，酶活计算要除以酶的质量，但是固载酶中酶的质量是怎么确定的呢？
我一直使用考马斯亮蓝测蛋白质含量，通过蛋白质含量的比例推算出固载的酶的量。不知道这种做法对吗？
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67楼2016-08-11 22:19:12
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yang2325182

金虫 (正式写手)
引用回帖:
67楼: Originally posted by 琉璃月028 at 2016-08-11 22:19:12
借此机会再请教您几个问题吧，在做固载酶的时候，我看文章会将固载酶的活性与自由酶的活性进行比较。我一直比较迷茫的是，酶活计算要除以酶的质量，但是固载酶中酶的质量是怎么确定的呢？
我一直使用考马斯亮蓝测 ...

我当时也遇到这样的问题的。我的方法是一种是粗略计算，就是通过测量结合前后溶液里的酶的差值，计算出多少酶结合上去了，在计算出理论的多少载体上结合了多少的酶。第二个是把结合的酶高温变性，以SDS去跑胶，在再用其他标准的蛋白去做标准曲线，用凝胶成像仪的相对定量的方法来测试。
说实在的，酶量测量本来就是粗略的。在不影响实验结论的情况下，我觉得都可以吧。
这个实验还是很难做的。我做的也不好，所以只能参考下我的做法，还需要再深思熟虑~~
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o(╯□╰)o
68楼2016-08-12 15:24:34
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琉璃月028

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
68楼: Originally posted by yang2325182 at 2016-08-12 15:24:34
我当时也遇到这样的问题的。我的方法是一种是粗略计算，就是通过测量结合前后溶液里的酶的差值，计算出多少酶结合上去了，在计算出理论的多少载体上结合了多少的酶。第二个是把结合的酶高温变性，以SDS去跑胶，在再 ...

你测结合前后溶液的酶的差值  是用的考马斯亮蓝的方法吗？ 在用考马斯蓝的时候 紫外的参比你用的是啥啊 我用的是考马斯亮蓝加水（检测池是考马斯亮蓝加酶液） 但有时候的吸收为负数 很郁闷啊
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69楼2016-08-13 08:42:41
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yang2325182

金虫 (正式写手)
引用回帖:
69楼: Originally posted by 琉璃月028 at 2016-08-13 08:42:41
你测结合前后溶液的酶的差值  是用的考马斯亮蓝的方法吗？ 在用考马斯蓝的时候 紫外的参比你用的是啥啊 我用的是考马斯亮蓝加水（检测池是考马斯亮蓝加酶液） 但有时候的吸收为负数 很郁闷啊...

用BCA试剂盒做的浓度，之后用个酶标仪做标准曲线。碧云天的试剂盒，很好用。
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70楼2016-08-14 20:01:39
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