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yang2325182金虫 (正式写手)
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[交流]
酶活定义
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大家好，我最近在做一个固定化酶相关的实验，需要比较固定化酶(immobilized enzyme)与游离酶（free enzyme）之间一些性质的差异。 我看文章上大家基本都是用relative activity来表示没活性的差异，比如说把某个催化活性作为百分之百，其他的跟他比，而在实际实验测量 过程中，有些人是将反应生成物啊，hplc峰面积啊等等作为酶活力的衡量指标。 我想请问一下，这种相对的设定是有一定的规矩的吗？还是说必须要测量米氏常数来衡量。因为从米氏常数的定义来看的话，在反应经过较长 时间之后，确实是不能够很好的反应酶与底物的亲和性，而作为初始反应速率的米氏常数可能会更合适吧。 所以在此发帖，希望能够得到虫友的帮助，求指点，我到底该用哪个来作为我的酶活呢？ 另外，我想问一下，我是否可以选择合适的底物浓度与酶浓度，确保我的底物水解量保持在短时间内（5min内）处于一个较低的水解率（小于10%）这样，保证底物还是处于一个较高的浓度，这样的底物的水解量，是否可以代表初始反应速率？而我不需要去计算米氏常数km kcat（由于反应难于监测，测量误差经过计算会很大）直接用这样的底物水解值做一个relative activity? 求大神指点~~ |
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tableman
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