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yang2325182金虫 (正式写手)
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[交流]
酶活定义
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大家好,我最近在做一个固定化酶相关的实验,需要比较固定化酶(immobilized enzyme)与游离酶(free enzyme)之间一些性质的差异。 我看文章上大家基本都是用relative activity来表示没活性的差异,比如说把某个催化活性作为百分之百,其他的跟他比,而在实际实验测量 过程中,有些人是将反应生成物啊,hplc峰面积啊等等作为酶活力的衡量指标。 我想请问一下,这种相对的设定是有一定的规矩的吗?还是说必须要测量米氏常数来衡量。因为从米氏常数的定义来看的话,在反应经过较长 时间之后,确实是不能够很好的反应酶与底物的亲和性,而作为初始反应速率的米氏常数可能会更合适吧。 所以在此发帖,希望能够得到虫友的帮助,求指点,我到底该用哪个来作为我的酶活呢? 另外,我想问一下,我是否可以选择合适的底物浓度与酶浓度,确保我的底物水解量保持在短时间内(5min内)处于一个较低的水解率(小于10%)这样,保证底物还是处于一个较高的浓度,这样的底物的水解量,是否可以代表初始反应速率?而我不需要去计算米氏常数km kcat(由于反应难于监测,测量误差经过计算会很大)直接用这样的底物水解值做一个relative activity? 求大神指点~~ |
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