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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 求助：ODS柱修复问题
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李小香

银虫 (小有名气)
流动相是0.25%的磷酸二氢胺-乙腈（40-60），所有的峰都有肩峰，如果不是柱子的问题，请问会是什么地方的问题？
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11楼2008-10-08 11:27:57
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wuyahedatou

银虫 (初入文坛)
不知道你是哪家的柱子哟，你问问厂家能不能反冲啊？最好不要拆开来
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12楼2008-10-09 08:59:01
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zhengfei898

金虫 (小有名气)

ODS柱修复问题

色谱柱的保存
一、反相色谱柱每天实验后的保养
　　使用缓冲液（或含盐）作流动相，每天实验完成后，应用10倍柱体积的不含且可溶解缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，便色谱柱中的盐完全洗掉。应特别注意：不能用纯有机溶剂直接冲洗色谱柱，以防止盐析出，堵塞色谱柱或仪器管路，而使色谱柱报废。
　　如果想把色谱柱中的强吸附物质冲洗出来，可继续用纯甲醇（或纯已睛）冲洗色谱柱。这样能使实验期间基线更平稳。
二、长期保存色谱柱
　　如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或纯已睛中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正乙烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。对使用过含盐浓度较高的流动相的反相柱，在储存之前，必须先用10倍柱体积的不含且可溶解缓冲盐的流动相（如：甲醇含量相对较低的10%的甲醇-水溶液）置换掉原来的流动相后，再储存于合适的溶剂状态下。储存的温度最好是室温。
色谱柱的再生
　　因为高效液相色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
一、反相柱子的再生
　　顺次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90（V/V），已腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
二、正相柱
　　顺次以20-30倍色谱柱的体积的正已烷，异丙醇，二氯甲烷，甲醇作为流动相冲洗色谱柱（因异丙醇的粘度较大，冲洗过程中请随时注意调整冲洗流速），然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必须严格脱水。
三、离子交换柱的再生
　　长时间在高PH值和高离子强度缓冲溶液中使用，将导致色谱柱离子交换能力降低。用稀酸缓冲溶液冲洗使阳离子柱再生；用稀碱缓冲溶液冲洗可使阴离子柱再生。
　　以上色谱柱的再生方法并不是绝对的标准方法，用户可根据自己的实际经验和目的，选择合适的并能溶解柱内污染物的溶剂作流动相进行再生。
色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法
　　高效液相色谱柱在使用过程最容易碰到的问题就是柱压升高。如果柱压是在长时间使用过程中缓慢地增加，通常这属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：

（1）、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
（2）、色谱柱头的填料被样品污染；
（3）、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出；
（4）、流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。

解决办法如下：
（1）、当确定是色谱柱头的过滤筛板被污染时，卸下色谱柱头，将其放在30%在右的稀硝酸内用超声波超声清洗约10分钟，后再用超纯水超声约10分钟，重新装入色谱柱。
（2）、当断定是色谱柱头的填料被污染时，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
(3)、当断定是盐结晶时，用甲醇含量相对较低的甲醇-水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
（4）、如果因PH值使用不当，很难恢复。
色谱柱的使用说明
一、色谱柱使用前注意事项
　　色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。对于在正相条件下评价的色谱柱，如果使用的条件为反相时，请用一个中介流动相（如异丙醇）先置换掉柱内的储存液，然后再应用于反相条件，否则，会对色谱柱造成极大的伤害，将会明显地减少色谱柱的使用寿命。在反相色谱柱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，一定不要把色谱柱直接接上，应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过度一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机中很容易析出，而使色谱柱堵塞，无法恢复。
二、色谱柱的使用方向
　　色谱柱标签上的箭头所示方向是装填和评价时流动相流动的方向，使用过程中流动相的方向也应按此方向。
三、流动相
　　流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能地使用色谱纯，或至少是分析纯试剂；配流动相的水最好是超纯水或者是全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45或0.22μm的滤膜过滤一次则更好，这一点对含盐的流动相尤为重要。另外，装流动相的溶器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。总之，必须保证所使用的流动相和色谱系统是足够的清洁。
四、样品
　　样品也要尽可能的清洁，同样可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，如无特殊要求，所有的溶剂和样品都应严格脱水。
更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？
这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。
做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？
原因可能有：
1． 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；
2． 比例阀失效，更换比例阀即可；
3． 泵密封垫损坏，更换密封垫即可；
4． 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；
5． 系统检漏，找出漏点，密封即可；
6． 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
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13楼2008-10-09 11:14:53
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真的可以吗

楼上的真厉害
学习了
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14楼2008-10-09 12:02:31
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zhaozengli

★ ★
李小香(金币+2,VIP+0):非常感谢您的经验交流
引用回帖:
Originally posted by 李小香 at 2008-9-27 16:06:
请问有哪位亲自拆开过液相色谱柱吗？我用的色谱柱最近峰型变丑，出现肩峰，我认为是柱效下降了，之前没有用预柱，用低流速（0.5ml/min)、高温（50度）先是甲醇-水（5：95）然后是100%乙腈长时间冲洗后效果不佳，在 ...

你要讲明白你的实验过程啊,有没有什么不应该的操作造成的.排除一个再看是什么原因了,柱子没有坏可以进行反冲,基本可以解决的,5%甲醇或纯水反冲2小时以上流速.0.5ml/min或更高,(当然同时也要看你的柱子规格了.不能太大也不要太小).柱子坏了你没有填料是没有办法的.你想死马当活马医的话,可以照大家的方法拆开试试.
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15楼2008-10-16 11:15:52
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李小香

银虫 (小有名气)
以前很正常啊，操作应该是没问题的，好几个样品都有肩峰。不过今天我做了一下性能测试，发现苯酚的峰型是正常的，跟以前测过的基本一样，保留时间一致，只是柱压升高了0.4MPa.
另外，还分析过苯胺，有明显的肩峰，不知道怎么解释，头大
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16楼2008-10-16 17:11:36
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李小香

银虫 (小有名气)
非常感谢各位虫友的热情帮助，想给你们金币，可不知道怎么给，呵呵，别笑话我啊
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17楼2008-10-16 17:13:23
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