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Blue Native-PAGE条带弥散
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| 最近在做native-PAGE，要观察的蛋白是否存在两种不同的聚体，二聚体91KD和四聚体200KD（四聚体已经确定存在），该重组蛋白，酸性蛋白，PI 为5.4左右，带有his-tag标签，Ni-NTA纯化后，能够检测到酶活。用的是life technologies 的Blue-native PAGE 预制胶。但是跑native-PAGE之后，条带弥散，marker（最左边）也跑得很不好，如图。电泳时间很长，80V 1小时，110V跑了7个小时，4度环境下跑的。请各位大神分析一下原因。是蛋白浓度过高？我是按照说明书操作的，但是我的蛋白是纯化过的，上样量在1.1到4.4ug之间。或者是电泳条件的原因？还是蛋白需要用detergent增溶一下？但是我的蛋白不是膜蛋白，应该不存在这个问题。还有，我是不是换成Tris-gly电泳体系跑，是不是，结果更糟啊。 |
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2016-01-04 11:47:03, 1.36 M
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