| 查看: 2089 | 回复: 0 | ||
[求助]
Blue Native-PAGE条带弥散
|
| 最近在做native-PAGE，要观察的蛋白是否存在两种不同的聚体，二聚体91KD和四聚体200KD（四聚体已经确定存在），该重组蛋白，酸性蛋白，PI 为5.4左右，带有his-tag标签，Ni-NTA纯化后，能够检测到酶活。用的是life technologies 的Blue-native PAGE 预制胶。但是跑native-PAGE之后，条带弥散，marker（最左边）也跑得很不好，如图。电泳时间很长，80V 1小时，110V跑了7个小时，4度环境下跑的。请各位大神分析一下原因。是蛋白浓度过高？我是按照说明书操作的，但是我的蛋白是纯化过的，上样量在1.1到4.4ug之间。或者是电泳条件的原因？还是蛋白需要用detergent增溶一下？但是我的蛋白不是膜蛋白，应该不存在这个问题。还有，我是不是换成Tris-gly电泳体系跑，是不是，结果更糟啊。 |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : WP_20151208_09_48_21_Pro.jpg
2016-01-04 11:47:03, 1.36 M
» 猜你喜欢
网上报道青年教师午睡中猝死、熬夜猝死的越来越多，主要哪些原因引起的？
已经有3人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有10人回复
-
版面费该交吗
已经有12人回复
-
面上可以超过30页吧？
已经有5人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有13人回复
-
“人文社科而论，许多学术研究还没有达到民国时期的水平”
已经有5人回复
-
什么是人一生最重要的？
已经有4人回复