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liuyi657008

金虫 (小有名气)

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[交流] 哪个是TMB峰？加不加停止液测出来的峰一样么？为什么

用96微孔板包被抗体，再加抗原结合，再加用葡萄糖氧化酶标记的抗体结合，形成夹心型的传感器；再加入D-葡萄糖，加入TMB通过催化产生的H2O2而显色。最后我没加停止液，所以测出来的结果就是这个了。。。想请大神分析一下，哪个是TMB峰？500nm以后都没峰，加不加停止液测出来的峰一样么？

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1楼 2016-01-02 15:34:28

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shujian10088

木虫 (正式写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyi657008: 金币+5, 一般我们标记抗体都能标记得上去，颜色发生改变无色到蓝色，我昨天测得加了种植业后450nm出峰了，感觉好奇怪。 2016-01-03 13:28:05

你这个实验我觉得有几个明显问题。
1.葡萄糖氧化酶标记的抗体是自己标记的么？很难有效结合！
2.一般TMB-H2O2体系需要催化剂或者酶，否则短时间很难观察到现象。
3 有没有效果你直接看有没有变颜色变化嘛，这很简单。
4.你不加终止液的话，你这个紫外吸收的测试范围也有问题啊，不加终止液蓝色吸收在600多，你说500以后没峰了，那就是没现象咯，那溶液也就是没有颜色变化，对吧？
5。你没明白TMB显色原理，终止液的作用，如果是一个正常的TMB显色实验，加不加终止液那吸收肯定不一样啦，一个黄色一个蓝色。