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多肽合成 抗原多肽常见的一些基本问题
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1、多肽与载体蛋白交联 对在动物体内产生免疫反应而言，大多数多肽的分子量都太小。将多肽与载体蛋白如KLH等交联之后，不仅能增加抗原的大小，也能增强免疫性。我们可以提供与KLH和BSA两种蛋白的交联。大多数客户选择与KLH交联，因为KLH的免疫性更好，而且BSA在很多实验中作为Blocking试剂，由于动物体内既会产生对多肽的抗体也会产生对载体蛋白的抗体，这样会出现假阳性。 2、抗体的使用 由于抗体与很多生物分子，以蛋白和多肽等尤为显著，有很强的结合能力，抗体在生物医学研究中占据独特的重要地位，在对蛋白的特性、含量的测定、分布情况的分析和蛋白的确证等方面都需要用到抗体。例如：诊断试剂盒如早孕试剂盒等，蛋白microalloy、immunohistochemistry 和普通的ELISA实验等。由于抗体有对特定分子很强的结合能力的特点，用抗体进行体内治疗成了许多努力的方向。成功的范例包括Genetech的Herceptin,用于治疗一类特殊的乳腺癌和IDEC药业公司的Ritaxan，用于特定类型的Non-Hodgkin`s Lymphomas B-细胞。 3、抗原和识别区域： 大多数情况下，antigen和immunogen两个字是可以互换使用的，它们的差别是很小的。他们是分别指一个分子与免疫系统之间的两种类型的相互作用。一个immunogen是指能使一个生物组织的免疫系统产生免疫反应的分子，而一个antigen是指能与这种免疫反应的产物结合的分子，所以immunogen一定是antigen，但antigen不一定是immunogen，我们这里通用antigen，特指能与免疫反应的产物—抗体结合的分子。识别区域（epitopes）是指一个抗原分子中一个与抗体直接结合的一段特定的序列，对于任何抗原（抗原蛋白），很有可能有多个抗体识别区域，对生产抗体而言，易于抗体识别的部位的识别区域最 4、进行KLH交联的化学方法 我们用MBS活化KLH，这样能将载体蛋白（KLH）上面的自由-SH与多肽末端的Cys的侧链-SH连接起来，这种方法直接，特异性高，而且稳定，通常选择对免疫不重要的一端进行交联。EDC活化载体上的-COOH，将载体的-COOH和多肽的-NH2连接起来也是一种可行的方法。但我们只建议在多肽序列中有多个Cys时采用该方法。如果肽链中含有多个-COOH或-NH2基因，不建议使用该方法，因为会造成多重点交联的情况，使多肽结构受影响。常用载体蛋白除KLH外，还有BSA，Ovalbumin等，造成KLH的优势是它不干扰ELISA或Western Blot等实验。 5、对抗原多肽交联合适的肽链长度 通常建议10-15个残基进行交联。肽链越长，抗体识别的区域越多，但也就越多机会形成稳定的二级结构。就不再是天然的形式了。太短的肽通常是没有用的，除非有充足的理由，如与相关家族蛋白或其他蛋白有序列同源性等。 6、KLH交联多肽溶液呈乳状的原因 KLH是一个很大的并且聚合的蛋白。因为它的结构和大小，它在水中的溶解度是很有限的，因此是乳状，这并不影响它的免疫性，这种混浊的溶液可以直接免疫动物。 7、抗体的产量 抗体的产量取决于很多因素：识别区域的选择，多肽的合成，载体的交联，免疫的操作步骤和动物的生理系统等等，因此抗体的产量是不等的。5-25mg都属于正常范围。 原文地址：http://blog.sina.com.cn/s/blog_132fb62500102w03l.html |
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