24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 683  |  回复: 6
当前主题已经存档。

neuwzz

[交流] 关于引物设计中Tm的问题

初学引物设计,看了些相关的文章,对引物的Tm有些疑惑,希望有人指教
在有的文章中说Tm值一般控制在55-60度,有的是55-65度,再有的说接近72度比较好,而有的实验室设计在50度左右
想问下为什么有这么大的差别?
是不是引物的温度并不重要,还是其他什么原因?
那真正要设计引物的时候该怎么办?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


neuwzz(金币+1,VIP+0):谢谢
退火温度越高,特异性越高
当然也不用高到太过分的说,这是很难设计出来的
引物越长,GC比越高,退火温度也越高
当然越长也越有较高几率形成dimer
权衡利弊吧
但一般不要低于50
也就是Tm最好不小于55
不过还是看你的具体应用,无视杂带影响,那么只要和dimer分开就好
2楼2008-09-25 20:57:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuwzz

谢谢楼上
不过看到一本书上说通常退火温度是37-55度
但是这样一来Tm不是40多度就可以了么
3楼2008-09-25 21:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bluesea1026


neuwzz(金币+1,VIP+0):谢谢
一般都用Oligo软件设计,Tm在60℃附近;引物由公司合成回来后,报告单上也会给出一个Tm值,一般和设计时接近。
如果您是从质粒上扩增,大可不必担心,不要loop值太高(比如94℃什么的),一般一定范围内浮动都是可以扩增出来的。
调基因或者其他用途就要尽量严格了。
4楼2008-09-25 21:11:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuwzz

引用回帖:
Originally posted by bluesea1026 at 2008-9-25 21:11:
一般都用Oligo软件设计,Tm在60℃附近;引物由公司合成回来后,报告单上也会给出一个Tm值,一般和设计时接近。
如果您是从质粒上扩增,大可不必担心,不要loop值太高(比如94℃什么的),一般一定范围内浮动都是 ...

不过老师让我们用dnaclub设计 要求的Tm是45度左右
是不是这个软件计算的Tm比其他软件偏低的原因呢
5楼2008-09-25 21:15:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


neuwzz(金币+1,VIP+0):继续感谢
Tm有很多种计算方式的
但都是经验公式
没有所谓的哪个准或者不准
一般primer 5给出的Tm减5度就可以出来
注意,Tm是半数复性温度,而不是等于退火温度
6楼2008-09-25 21:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuwzz

发现相同引物dnaclub得出的Tm比Primer5小很多
以后做实验得注意
7楼2008-09-25 21:44:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 neuwzz 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 材料292调剂 +12 橘颂思美人 2026-03-23 12/600 2026-03-27 15:44 by caszguilin
[考研] 275求调剂 +6 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 6/300 2026-03-27 15:18 by caszguilin
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 食品工程专硕求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 3/150 2026-03-27 01:14 by dgnhs
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 求调剂 +6 白QF 2026-03-21 6/300 2026-03-26 20:37 by fmesaito
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +8 y7czhao 2026-03-26 8/400 2026-03-26 19:51 by 不吃魚的貓
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见