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寻一束光

铁虫 (小有名气)

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[求助] α-葡萄糖苷酶活力的测定，哪位大神做过啊？？跪求指导已有1人参与

α-葡萄糖苷酶活力的测定
酶活力单位定义: 37 ℃ ， pH 6. 8 条件下，每 1 min 水解底物产生       1μmol/L 对硝基苯酚的酶量，定义为 1 个酶活力单位 ( U)。
酶活力测定:
   40μL 磷酸钾缓冲液 ( pH 6. 8) ，加入 0.2 U/mLα-葡萄糖苷酶 20μL， DMSO 40μL，37 ℃ 恒温 15 min 后加入 2mmol/LPNPG 20μL， 37 ℃ 恒温反应 20 min。再加入 0. 2 mol/L 的Na2 CO3 水溶液 80 μL，于 405 nm 波长下测 A 值。

标准曲线制作根据采用的反应体系，用磷酸缓冲液 ( pH 6. 8) 配制1000
umol/L PNP，稀释成 400，300， 200， 150， 100， 50， 0umol/L。分别取7 种不同浓度的 PNP 溶液各 20μL，加入40μL 磷酸钾缓冲液 ( pH 6. 8)  ，蒸馏水20ul,DMSO 40ul,0.2 mol/L  Na2CO3 的水溶液 80 μL，混匀，在 405 nm 下测定A，测 6 组取平均值。以 A 为纵坐标Y，对硝基苯酚浓度为横坐标X，做出标准曲线,Y=aX+b。
      根据酶活力定义得酶活力=200X/40
但是我带入的反应时间是20分钟。可是我怎么确定20分钟酶刚好反应完全，如果反应时间多余或少于20分钟，那么测得的酶活力不就不准了么？
新虫入行，金币不多，大家帮帮忙~~~