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α-葡萄糖苷酶活力的测定，哪位大神做过啊？？跪求指导 已有1人参与
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α-葡萄糖苷酶活力的测定 酶活力单位定义: 37 ℃ ， pH 6. 8 条件下， 每 1 min 水解底物产生 1μmol/L 对硝基苯酚的酶量， 定义为 1 个酶活力单位 ( U)。 酶活力测定: 40μL 磷酸钾缓冲液 ( pH 6. 8) ，加入 0.2 U/mLα-葡萄糖苷酶 20μL， DMSO 40μL，37 ℃ 恒 温 15 min 后 加 入 2mmol/LPNPG 20μL， 37 ℃ 恒温反应 20 min。再加入 0. 2 mol/L 的Na2 CO3 水溶液 80 μL， 于 405 nm 波长下测 A 值。 标准曲线制作 根据采用的反应体系， 用磷酸缓冲液 ( pH 6. 8) 配制1000 umol/L PNP， 稀释成 400，300， 200， 150， 100， 50， 0umol/L。分 别 取7 种不同浓度的 PNP 溶液各 20μL， 加入40μL 磷酸钾缓冲液 ( pH 6. 8) ，蒸馏水20ul,DMSO 40ul,0.2 mol/L Na2CO3 的水溶液 80 μL， 混匀， 在 405 nm 下测定A， 测 6 组取平均值。以 A 为纵坐标Y， 对硝基苯酚浓度为横坐标X， 做出标准曲线,Y=aX+b。 根据酶活力定义得酶活力=200X/40 但是我带入的反应时间是20分钟。可是我怎么确定20分钟酶刚好反应完全，如果反应时间多余或少于20分钟，那么测得的酶活力不就不准了么？ 新虫入行，金币不多，大家帮帮忙~~~  |
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2楼2015-12-28 14:17:50
