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wuyaping

新虫 (初入文坛)

[求助] 离子交换柱用AKT系统纯化蛋白过程中的离子曲线的一个奇怪现象已有1人参与

我用的是Q柱,柱体积5ml,纯化天然蛋白用的缓冲液(A: 50mM MES,  B: 50mM MES+1M Nacl,pH=6),洗脱程序0-20%B液线性洗脱,照理说离子曲线应该是一条直线,可是当我的目标峰出现时候离子线总会出现一个激增转折(见图),不知是怎么回事(自己弱弱的认为是不是我的目标蛋白是一个含有离子的蛋白)?特来借大家的火眼金睛,跪求大侠们的高见!

离子交换柱用AKT系统纯化蛋白过程中的离子曲线的一个奇怪现象
图片2.png
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milamiya

禁虫 (小有名气)

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4楼2016-01-03 08:36:03
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
AKTA的管路很长,及混合器是2ml,拉梯度上升的太快就这样子,正常。建议B0-20%多拉几个柱体积,比如现在10个柱体积,可以增加到30,或者更多,会使纯化的效果更好,祝顺利。
2楼2015-12-25 16:29:42
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wuyaping

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-12-25 16:29:42
AKTA的管路很长,及混合器是2ml,拉梯度上升的太快就这样子,正常。建议B0-20%多拉几个柱体积,比如现在10个柱体积,可以增加到30,或者更多,会使纯化的效果更好,祝顺利。

感谢您的回复。二十个体积的梯度我也拉过,也同样会出现这个现象
3楼2015-12-26 11:21:17
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