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wa312582478新虫 (初入文坛)
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[求助]
免疫印迹出现的问题
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新手一枚，最近在做免疫印迹 1.我的蛋白是重组蛋白（65KDa）含6个His标签，来源于乳杆菌某蛋白的部分基因，连接重组到大肠杆菌（BL21（DE3））并诱导表达； 2. 分离纯化后，送至中科院遗传动物发育所进行多抗的制备，一抗动物为小鼠，共四只； 3.四只抗体都用ELASA做了效价评估，2号效价最好； 4.现在我设立四个组分别做了WB和ELASA：重组蛋白、大肠杆菌蛋白、乳杆菌蛋白和植物乳杆菌蛋白。想用以检测该蛋白在微生物界里的分布状况； 5.可结果存在很大问题，重组蛋白信号有三条带，但主带（目的蛋白条带）信号最强；大肠杆菌蛋白有微弱的多条信号（考虑是制备抗体的抗原不纯）； 乳杆菌蛋白和植物乳杆菌蛋白皆无任何信号？？？ 但是ELASA各个信号都都为阴性对照的两倍以上，也就是说用四个蛋白对应菌体来做ELASA结果都为阳性。 想请教一下各位高手问题出在哪里？急急急！！！！！ |
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