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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急救 PCR中的问题
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daniel867

[交流] 急救 PCR中的问题

我要扩增一个  2500 bp 的片段，p 了很多次，但总是扩不出来，阳性对照就p出来过一次，引物应该没有问题，会是什么问题呢？  
会不会是酶的问题？应该用那家的酶啊？
有哪位做过或知道的高人帮忙分析一下，不胜感激

[ Last edited by daniel867 on 2008-9-25 at 07:37 ]
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1楼 2008-09-25 07:36:51
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chenmm1213

我同学也出现过这种问题，不过换个人做一下子就做出来了，你也换个人试试，说实话，我觉得运气也占一部分。呵呵，你就当我乱说的，毕竟没什么依据
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2楼2008-09-25 08:07:35
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饼干房子

新虫 (初入文坛)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2):谢谢参与！
你可以试试TAKARA公司的一个长片断酶，价格不是很贵，不过很好用。还有就是延伸时间应该在算出来的时间的基础上至少加上30秒钟。
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3楼2008-09-25 08:56:19
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zfbhunting

新虫 (初入文坛)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2):谢谢参与！
PCR还是很灵敏的  阳性对照P不出就应该从自身的操作找问题    比如各成分的添加顺序   还有有没有混匀   这些都很重要  普通的用rTaq酶就可以  要高保真的话就用Pfu酶好了
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4楼2008-09-25 11:06:02
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2):谢谢参与！
一，可以换个酶试一下
二，你可以不换酶，但是调整一下反应体系，换一下buffer
三，分析一下你的模板是不是有问题
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5楼2008-09-25 16:20:58
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bluesea1026

同意楼上的，阳性没问题系统就应该正常，跑胶看看模板是否降解。
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6楼2008-09-25 21:15:38
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daniel867

谢谢这么多热心朋友
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7楼2008-09-28 23:51:12
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