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daniel867

[交流] 急救 PCR中的问题

我要扩增一个  2500 bp 的片段,p 了很多次,但总是扩不出来,阳性对照就p出来过一次,引物应该没有问题,会是什么问题呢?  
会不会是酶的问题?应该用那家的酶啊?
有哪位做过或知道的高人帮忙分析一下,不胜感激

[ Last edited by daniel867 on 2008-9-25 at 07:37 ]
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chenmm1213

我同学也出现过这种问题,不过换个人做一下子就做出来了,你也换个人试试,说实话,我觉得运气也占一部分。呵呵,你就当我乱说的,毕竟没什么依据
2楼2008-09-25 08:07:35
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饼干房子

新虫 (初入文坛)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2):谢谢参与!
你可以试试TAKARA公司的一个长片断酶,价格不是很贵,不过很好用。还有就是延伸时间应该在算出来的时间的基础上至少加上30秒钟。
3楼2008-09-25 08:56:19
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zfbhunting

新虫 (初入文坛)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2):谢谢参与!
PCR还是很灵敏的  阳性对照P不出就应该从自身的操作找问题    比如各成分的添加顺序   还有有没有混匀   这些都很重要  普通的用rTaq酶就可以  要高保真的话就用Pfu酶好了
4楼2008-09-25 11:06:02
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2):谢谢参与!
一,可以换个酶试一下
二,你可以不换酶,但是调整一下反应体系,换一下buffer
三,分析一下你的模板是不是有问题
5楼2008-09-25 16:20:58
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bluesea1026

同意楼上的,阳性没问题系统就应该正常,跑胶看看模板是否降解。
6楼2008-09-25 21:15:38
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daniel867

谢谢这么多热心朋友
7楼2008-09-28 23:51:12
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