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y8d4p

木虫 (正式写手)

[交流] pcr引物设计有杂带,恳请帮助

恳求各位,我试验中pcr引物设计一直有杂带,设计了快十对引物了,
因为要做定量,实在不知道该怎么办了,恳请各位大侠帮忙。
以下是我的原序列:
ORIGIN
1 cgccgagctg tgtgtccacc gccagaccag agttcttttg gttggacaga tctgtgagtc
61 ttcccaggag agcacccttg ggctctgctc gcccctgctc cttcagggat ggaggcaatg
121 gcagccagca cctccctgcc tgaccctggt gactttgacc ggaatgtgcc tcggatctgt
181 ggagtgtgtg gagaccgagc cacgggcttc cacttcaacg ctatgacctg tgaaggctgc
241 aagggtttct tcaggcggag catgaagcgc aaggccctgt tcacctgccc cttcaatgga
301 gattgccgca tcaccaagga caaccggcga cactgccagg cctgccggct caaacgctgc
361 gtggacattg gcatgatgaa ggagttcatc ctcacagatg aggaggtgca gcgtaagcga
421 gagatgatca tgaagaggaa ggaggaagag gccttgaagg acagtctgag gcccaagctg
481 tctgaggagc aacagcacat tatcgccatc ctgctcgatg cccaccacaa gacctacgac
541 cccacctatg ccgacttccg ggacttccgg cctccaattc gtgcagacgt aagtacaggg
601 agctattctc caaggcccac actcagcttc tccggagact cctcctcaaa ctctgatctg
661 tacaccccct cactggacat gatggaaccg gccagctttt ccacgatgga tctgaatgaa
721 gaaggctccg atgacccctc tgtgaccctg gacctgtctc cgctctccat gctgccccac
781 ctggctgatc ttgtcagtta cagcatccaa aaggtcatcg gctttgccaa gatgatccct
841 ggcttcaggg acctcacctc tgatgaccag attgtcctgc ttaagtcaag tgccattgag
901 gtgatcatgt tgcgctccaa ccagtctttt accatggatg acatgtcctg ggactgtggc
961 agccaagact acaaatatga catcactgat gtctccagag ctgggcacac cctggagctg
1021 atcgaacccc tcataaagtt ccaggtgggg ctgaagaagc tgaacctcca tgaggaagaa
1081 catgtgctgc tcatggccat ctgcattgtc tccccagacc gacctggggt acaggacgct
1141 aagctggttg aagccattca ggaccgccta tccaacacgc tgcagaccta catccgctgc
1201 cgccacccgc ccccgggcag ccaccagctc tacgccaaga tgatccagaa gctggctgac
1261 ctgcgaagcc tcaatgagga gcactccaaa cagtaccgtt ccctctcctt ccagccggag
1321 aacagcatga agctcacacc ccttgtgcta gaggtgtttg gcaatgagat ctcctga
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qfzhang

银虫 (小有名气)

特异性和PCR的条件是有极大关系的,就算是引物完美,条件不合适,照样有杂带
5楼2008-09-26 08:53:17
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boouy

银虫 (正式写手)

Blast分析基因组中是否有同源基因。
2楼2008-09-25 07:53:42
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y8d4p

木虫 (正式写手)

有同源基因,是要用同源度比较高的地方设计么?
3楼2008-09-25 18:21:29
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boouy

银虫 (正式写手)

当然是尽量避开同源区段,争取特异扩增。
4楼2008-09-26 08:06:33
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