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[交流]
真菌菌丝和孢子电镜透镜玻片的制备
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| 求助！哪位高人可否指点一下啊，请问怎么制备真菌菌丝和孢子的电镜和透镜玻片，感觉孢子很难离心出来，难以收集，收集完是先用缓冲液清洗还是先用戊二醛固定啊？菌丝的制备是否为挑出一部分菌丝然后用戊二醛固定啊？ |
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havedear
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2楼2008-09-24 15:48:48
lzhwin
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对于孢子这样很容易飘散的东西做样时一般需要预包埋：利用琼脂 明胶 甚至蛋清这样的东西将你的样品粘在一起（或者凝固）然后再进行下面的制样。时机你自己掌握吧，我们一般是在戊二醛前固定完成后进行，如果你的样品对固定要求不严格也可以在先包埋再固定。 孢子肯定是很难渗透的东西，我虽然没有做过孢子但是做过水稻，对于这种特殊样品有几个建议希望对你有帮助： 首先你要直到你想在多少倍下看样品，如果倍数要求不高（20000倍以下），你可以尽量延长相关的制样时间：预固定2天以上，后固定（四氧化锇）可以在室温固定5-10小时（正常是4度固定1小时），酒精梯度脱水延长到半小时到1小时一次 增加置换的梯度和时间（1：2 1：1 2：1等等）延长包埋剂渗透的时间和次数。上面的每一步都应该放在摇床上摇动加速渗透。最后如果条件允许建议使用低粘度的spurr树脂包埋，需要注意的是spurr要在包埋管（或者PCR管）中聚合，包埋板聚合的很脆切割性能不好。 |
3楼2008-09-25 16:36:07