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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 流式检测A2780细胞的CA125表达，检测不到荧光细胞
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zhuqiyu

铜虫 (小有名气)

[求助] 流式检测A2780细胞的CA125表达，检测不到荧光细胞 已有2人参与

A2780细胞用CA125一抗4度孵育过夜，第二天用二抗室温孵育近两小时，流式上机检测不出阳性细胞，现在分析有以下几个原因：
1、一抗或二抗的浓度太低，一抗是2μg/100μL，二抗是1:100体积。
2、A2780不表达CA125。
3、CA125在细胞膜上表达，并且会大量释放到培养基里，这样是否会导致膜上表达量很低，检测不出来。
因是第一次做流式间接标记荧光，对抗体使用浓度没经验，抗体说明书上没有流式浓度的要求，是否还有其他的原因导致检测不出来？请各位指教！
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1楼 2015-12-18 14:24:22
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhuqiyu: 金币+10 2015-12-23 09:23:54
确定抗体能用于流式
有些抗体只能作WB的，
一般能用于IP的 也可以用于流式
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2楼2015-12-18 16:23:02
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhuqiyu: 金币+10 2015-12-23 09:24:00
流式的仪器设置有检查过吗？带的荧光基团不一样，需要设置的激发光和检测光的波长也会不一样的
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3楼2015-12-18 19:08:12
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zhuqiyu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2015-12-18 16:23:02
确定抗体能用于流式
有些抗体只能作WB的，
一般能用于IP的 也可以用于流式

一抗可以用流式，细胞甩片染色都能看到荧光。
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4楼2015-12-23 09:21:18
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zhuqiyu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-18 19:08:12
流式的仪器设置有检查过吗？带的荧光基团不一样，需要设置的激发光和检测光的波长也会不一样的

二抗是PE荧光，因为是借的，找不到说明书，不能确定是不是搞错了。流式是BD FACSCalibur，488nm激光器能检测到PE荧光。
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5楼2015-12-23 09:22:47
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