24小时热门版块排行榜    

查看: 1927  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)

[求助] 哪位精通NCBI数据库的大神可以进来帮我看看这个基因吗? 已有2人参与

前提:之前在PDB上找了一个来源于黑曲霉的α-淀粉酶基因,找生物公司全基因合成了。但是表达不出来,原因很有可能是基因的ORF区存在缺失。搞了一年,现在研三,迫不得已得换一个基因合成,同样来源的α-淀粉酶。
1、小女找到了NCBI序号为xm_001393589.2和xm_001395291.2的α-淀粉酶,但是由于这两种酶在NCBI上的说明都没有显示出自那篇参考文献,显示是概念性转换的结果,所以很担心如果在这两条序列中任选一条合成(只合成CDS区),不知道是否能正常表达。
2、两条序列中哪条更有可能表达呢?两条序列的注释都不是很明确,请大神帮忙解释一下可好。
3、如何要全基因合成(CDS区),那是否要加上信号肽序列呢, 还是说只需要合成成熟肽即可,我的毕赤酵母载体上有信号肽,如何加上了基因自带的信号肽序列会不会对于他的表达更完整了呢?
请NCBI大神来解答呢。 拜托拜托。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by stone2239 at 2015-12-15 15:15:14
你和“柚小西”是一个人吗?
我认为只合成成熟肽即可,如果不去原序列信号肽,表达出的蛋白有两个信号肽,信号肽切割时未必能保证都切掉,如果没有都切掉,那留下的信号肽肯定会影响蛋白质折叠,最终影响蛋白质活 ...

确实是同一人, 只是由于金币不够,借来这个师妹的号发帖求助的。
哈哈。哈哈。
请问合成前体蛋白可以正常表达吗?
7楼2015-12-15 16:05:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

admission

木虫 (著名写手)

看看是不是这篇文献,里面好像提到你所要的版本号
链接: http://pan.baidu.com/s/1X9kr8 密码: k2dd
你的CDS应该是这部分吧,全基因合成应该不便宜吧,如果是土壕实验室,请忽略
一般做法是提RNA,反转录,合成ORF。如果没有内含子,也应该可以直接用DNA合成。
             atggtctc
      361 aatgtcggcc ctgcggcacg ggcttggggt cctctatctt gctagctggc tggggtcgtc
      421 gctggctgcc agcaccgagc aatggaagtc ccggtcaatc tatcagacca tgacggatcg
      481 gttcgcgcgc actgatggct caaccacctc cccctgcaac accacggagg gtctgtactg
      541 tggtggtacc tggcgcggca tgatcaacca tctggattac atccagggga tgggctttga
      601 tgccgtcatg atctccccta tcatcgagaa cgtcgaaggt cgcgtggagt acggagaagc
      661 ctatcacggc tattggcccg tggatctgta ctccctcaac tcgcactttg gaacccacca
      721 ggatctactg gacctgagtg atgccctgca tgctcgcgac atgtatctga tgatggacac
      781 agtcatcaac aacatggcct acatcaccaa tggctccgac cccgccaccc acatcgacta
      841 ctcaaccctg acccccttca atagctcgtc ttactaccat ccctactgta agatcaccga
      901 ctggaataac ttcaccaatg cccagctgtg ccaaaccggt gacaacatcg tggccttgcc
      961 cgatctgtat accgagcatg ccgaggtgca agaaaccctg agcaactggg ccaaggaagt
     1021 catctccacc tattccatcg acggcctccg catcgatgcc gcaaaacatg tgaaccccgg
     1081 cttcctgaag aatttcggcg atgcgcttga tatcttcatg accggcgaag tgctgcagca
     1141 agaggtcagc acaatctgcg attatcagaa caactacatc ggcagtctcc cgaattaccc
     1201 cgtctactac gccatgttga aggcctttac cttgggcaac accagcgccc tggccactca
     1261 ggtccagtcg atgaagaatt cctgtaatga tgtgaccgcc ttgtcgtcat tctccgaaaa
     1321 ccacgatgtc gcacgatttg ccagcatgac ccatgacatg gctctcgcga agaatattct
     1381 cacattcact cttctcttcg acggtgttcc catgatctat caaggtcaag agcagcatct
     1441 cgacggccct ggcagtccgg aaaaccgaga agcgatatgg ctctctgagt acaacaccga
     1501 cgccgagctc tacaagttga tcggcaagtt gaacgccatc cggaagcacg cctaccgact
     1561 cgacaatcac taccccgatg tcgagacgta ccccatcttc gaaggtggca gtgaactggg
     1621 attccgcaag ggaatcgaag gtcgacaggt ggtcatgctt ctgtccacgc aaggcacgaa
     1681 cagcagcgct tacaacctct cgatgccggt gagtttcacg ggtggcacag tagtgaccga
     1741 gattctgaac tgcgtcaact acacggtcaa cacccagagc gaactcgtgg ttccgatgga
     1801 taaaggagag ccgcgcgtgt tcttcccggc ggatctgatg cccggcagtg ggctgtgcgg
     1861 acttcctgtc gcgaatgtca cctatgctgc cttgaggacg cagggtgcag cggcggcgga
     1921 ggctgccttg tcgctaggta tcaagactga tgcagcttct agtgctttgc tttctctggg
     1981 gctgtctgtg gtggcgggtc tgattgtggg gatgtggtaa tatgctgata gctacagatg
     2041 ggttgagata tattatcatg
2楼2015-12-15 10:30:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by admission at 2015-12-15 10:30:08
看看是不是这篇文献,里面好像提到你所要的版本号
链接: http://pan.baidu.com/s/1X9kr8 密码: k2dd
你的CDS应该是这部分吧,全基因合成应该不便宜吧,如果是土壕实验室,请忽略
一般做法是提RNA,反转录,合成O ...

亲, 感谢你的帮忙,可是系统显示的不是应助回帖, 我给不了金币了,抱歉抱歉。
有一个问题需要请教,我粗略看了一下这个A.niger CBS513.88的全基因测序文章,看到关于α-淀粉酶的基因有四个,可是没有找到具体在NCBI中的序列编号呢?我们实验室都是全基因合成的,因为没有模板,所以,我最担心的是:没有其他文献显示有人做过这个基因的外源表达,我担心表达不出来。毕竟研三了哎,麻烦亲能给与一些如何找到你贴出来的基因序列的过程。
哪位精通NCBI数据库的大神可以进来帮我看看这个基因吗?
捕获1.PNG

3楼2015-12-15 11:05:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
屁桃粉: 金币+3, 有帮助 2015-12-15 13:16:50
不需要加你自己的信号肽,酵母表达载体上的信号肽可以保证胞外表达。
4楼2015-12-15 11:44:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见