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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 液相色谱柱
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tang318lin

金虫 (小有名气)

alina

[求助] 液相色谱柱 已有5人参与

2-氟-5-硝基苯甲醚 的HPLC检测
分析仪器：Water2695/2996
色谱柱：capcell core c18  4.6*100mm 2.7um    预柱：XDB  c18  4.6*12.5mm  5um
柱温：40度， 流速：1.2ml/min     A: 10m M KH2PO4 buffer（PH2.5）    B; MeCN
        A        B
0        75        25
10.8        52        48
19.2        20        80
25        20        80
25.1        75        25
30        75        25

20151117前的空白


现做的空白

试剂用的就是上次用过的，流动相新配的，
换到agilent1200上用，或是去保护柱，或是纯水和乙腈走梯度  都是这样,14-25min的峰放大了
但是用等度走乙腈水洗柱子是干净的（一条直线），用乙腈洗也是干净的，已经排除仪器问题。液相色谱柱
1.png


液相色谱柱-1
2.png


液相色谱柱-2
3.png
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  • 附件 1 : 2氟5硝基苯甲醚20151212.doc
    • 2015-12-13 16:28:10, 207 K

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爱若相惜即相依
1楼 2015-12-13 16:29:01
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fengsea0214

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tang318lin(星海慧儿代发): 金币+3, 多谢回帖交流 2015-12-16 17:00:42
这个也属于鬼峰的问题或者基线不平的问题，挺复杂的，你没有把检测波长放出来，这个也对问题判断很有用的。
建议你这样入手：
1）先用纯水把盐过渡一下，然后整个水相用甲醇置换，冲洗系统半个小时，再用纯水走梯度看问题还存不存在。
多走几次空白，看看基线稳定不稳定。
2）如果好了，就再配盐试试，如果盐有问题，就是盐的问题。如果没好，就是别的问题。那就更复杂了。
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努力为社会做出新药
5楼2015-12-14 13:11:35
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查看全部 8 个回答

liwanchun

木虫 (正式写手)
我想知道你用的预柱是  5um的，色谱柱是2.7um，起作用不？
赞一下 回复此楼
因害怕失败而不敢放手一搏，永远不会成功！
2楼2015-12-13 20:28:18
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shihuman

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tang318lin(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2015-12-16 17:00:22
很大的可能是污染物富集在色谱柱上，乙腈比例增加到一定程度了，污染物被洗脱下来了，就造成了后面的基线太高和鬼峰。
A相换为纯水，走梯度还是这样的话，看看水还是乙腈有问题了。有时候水可能会有问题，屈臣氏蒸馏水不错的。乙腈换Merck等比较好的品牌新开一瓶看看。

你文件里说“但是用乙腈水洗柱子是干净的（一条直线），用乙腈洗也是干净的”，如果乙腈比例用的很高，而且事先空白一直跑不好，应该不会是色谱柱脏了。
如果要排除是否色谱柱有问题，换一根新的试试看。
楼上说的你这个色谱柱粒径和预柱差这么多也很奇怪的。
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3楼2015-12-13 23:31:04
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容月~

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tang318lin(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2015-12-16 17:00:30
都是用的相同的流动相和水在两个机子上出现的峰在安捷伦上就会基线被放大
1.这是因为安捷伦的仪器精度达不到沃特世的精度，改善方法就是采用更好的纯水和更好的梯度乙腈，更好的盐。
2.水、盐、乙腈杂质在色谱柱上附集，改善方法就是用高有机相反复冲洗，梯度平衡多次。如果还是不行那就只有换回去沃特世的机子上了。
这就是为什么很多省所会有不同的仪器，而不是单一品牌  ，特别是沃特世的仪器卖那么贵还是有原因的。
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有希望就会有奇迹
4楼2015-12-14 08:41:33
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查看全部 8 个回答
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