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godpilote

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于病毒空斑实验已有1人参与

最近在尝试做空斑实验筛选病毒,因为实验室没人做过这方面,所以一直在默默的摸索。但是做了三次都失败了....  实验中有用到琼脂培养基来配制混合培养基。请问那琼脂培养基可以用跑电泳的琼脂糖配置,还是配细菌培养基的纯化琼脂粉来配制

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yyy0305

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几年前做过病毒空斑实验,用的是低熔点的琼脂糖,用培养基溶解琼脂糖,加热混匀后平衡到37度,吸去病变的细胞培养液,加入琼脂糖培养基,放室温至培养基凝固,这一步很重要,再放入培养箱培养

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2楼2015-12-11 20:17:14
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zoebio

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-11 20:17:14
几年前做过病毒空斑实验,用的是低熔点的琼脂糖,用培养基溶解琼脂糖,加热混匀后平衡到37度,吸去病变的细胞培养液,加入琼脂糖培养基,放室温至培养基凝固,这一步很重要,再放入培养箱培养
...

请问你为什么要吸去病变的细胞培养液,不是让它继续吸附细胞,培养一段时间,产生空斑吗?
3楼2016-11-22 11:26:25
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

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引用回帖:
3楼: Originally posted by zoebio at 2016-11-22 11:26:25
请问你为什么要吸去病变的细胞培养液,不是让它继续吸附细胞,培养一段时间,产生空斑吗?...

病毒在培养液中是处于随机运动状态的,单个病毒扩增以后的子代会扩散到其他地方,这样就达不到空斑测滴度的目的了,所以才需要用琼脂糖固定。病毒和细胞混合一段时间后,有活力的病毒已经进入细胞内,培养液里面的病毒这个实验看来是默认其没有活力了。
4楼2016-11-22 12:46:12
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