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免疫反应柱得制备，有效期至2008年10月8号
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柱子得制备过程及如何再生？ 希望知道的虫友提供帮助。 |
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sibianjing
木虫 (正式写手)
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zyw(金币+15,VIP+0):谢谢，我想问你是从那篇文献上看到的？可以告诉我文献的题目吗？
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1.3.2 免疫亲和柱的制备 参照Jane C. Chuang[8]以及Ping Su[9]方法, 将0.5 g CNBr 活化的sepharose- 4B 在1 mmol/L HCl 中预先溶 胀, 滤干溶剂后迅速与3 mL 溶解于偶联缓冲溶液中的 氯霉素抗体( 4.7 g/L) 混合, 置于4 ℃冰箱旋转反应过 夜。利用紫外分光光度计测定溶液中剩余抗体的方法, 评定免疫亲和柱的联接效率。再用10 mL 偶联缓冲液冲 去未偶联抗体, 抽干后迅速加入到10 mL 封闭缓冲溶液 中, 室温反应2 h 封闭未联接位点。反复使用5 倍柱体 积pH 8.0 的0.1 mol/LTris-HCl 平衡缓冲液和pH 4.0 的 0.1 mol/L 醋酸- 醋酸钠平衡缓冲液循环淋洗3 遍, 最后 用20 %乙醇将亲和柱饱和,置于4 ℃冰箱保存。 1.3.3 免疫亲和柱( IAC) 操作条件的选择 |
2楼2008-09-21 19:42:53
sibianjing
木虫 (正式写手)
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zyw(金币+5,VIP+0):谢谢！
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在实际样品上样时, 由于样品中有多种成分, 吸附 在亲和柱上的杂质会被洗脱下来并在使用HPLC 检测 时产生基质影响, 使得目标峰被遮盖或者不准确。在进 行洗脱前, 选用不同的洗涤剂清洗免疫亲和柱可以尽 量避免样品中杂质的影响。分析PBS,含2 %甲醇PBS 溶液, 含5 %甲醇PBS 溶液和含10 %甲醇PBS 溶液4 种不同洗涤剂的去除基质影响效果, 结果表明: 15 mL 的PBS 作为洗涤剂时, 无法消除牛奶带入的杂质对于 HPLC 分析的影响; 浓度大于2 %的甲醇均可比较理想 地消除牛奶的基质影响, 但当甲醇含量达到10 %的时 候, 抗原和抗体的结合受到影响, 降低了氯霉素的回收 率。由于有机溶液浓度越高, 抗体生物活性受到的影响 也相应越大, 于是在基质影响能够消除的前提下, 选择 甲醇浓度较低的含2 %甲醇的PBS 溶液为洗涤剂 |
3楼2008-09-21 19:44:53