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菌泥如何烘干
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xyklmu
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3楼2008-09-21 14:09:45
2楼2008-09-21 11:34:15
fkbp23
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只是听老板说过他在德国时曾经冷冻干燥保存过大量的大肠杆菌备用，设备应该就是 普通的冷冻干燥仪吧，步骤应该和冻蛋白，核酸差不多。在生物秀上看到这个步骤，不知能用否。 http://www.bbioo.com/bio101/2007/20463.htm |
4楼2008-09-21 15:45:12
fkbp23
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就是上面的附件，大家不用花金币了。
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细菌保藏规程 1 菌株的获取 2 基本形态的描述 形态描述包括培养特征等（详见微生物菌种资源共性描述表及细菌菌种资源描述规范）。 3 冷冻干燥保藏技术流程 3.1 标签的准备 保藏菌种的标记方法，为管外侧标记 3.2 保护剂的选择和准备 保护剂：10%脱脂乳或10%蔗糖。 （常用保护剂及制备方法见附件） 3.3 菌种的准备 4.5.1 菌液的准备 在所保藏菌种的最适培养条件下将细胞培养至对数末期，进行纯度检查后与保护剂混 合均匀，分装。纯度检查参见《微生物菌种纯度检测技术规程》。 4.5.2 用斜面培养物制备菌液 取1～2ml 保护剂，加到试管斜面培养物上，用较长的滴管轻轻涂擦斜面，制备均匀的 细胞悬液，注意不宜泡沫过多或刺挖琼脂。然后尽快分装到试管中。 4.5.3 用液体培养物制备菌液 离心收集液体培养物中的菌体，弃去上清液，加入保护剂（每毫升培养物加1～2ml）。 将培养物与保护剂混匀，分装试管。 3.4 预冻 将菌种放入－70℃冰箱预冻。预冻速度控制在每分钟下降1℃，使样品冻结到－35℃～ －40℃。 3.5 冷冻干燥 采用冷冻干燥机进行冷冻干燥。 将预冻后的样品迅速置于已充分预冷地冷冻干燥机样品舱内，关闭放气阀，打开真空 泵开始冷冻干燥，接近干燥完成时，适当升温（按冷冻干燥机地具体要求进行操作），确认 冷冻干燥完毕后，缓慢打开放气阀，取出样品安瓿管置于干燥器内，备用。冷冻干燥时间一 般为8～20h。 判断冷冻干燥已完成的指标： －安瓿管内冻干物呈酥松块状或松散片状。 －真空度接近空载时的最高值。 －冷冻干燥机显示的样品温度与舱内温度接近 －蒸馏水对照管中的水分已完全挥发掉或1％～2％氯化钴的对照管已呈深蓝色。 3.6 保藏 将试管内菌体装入菌种保藏管（制备方法见示范），低温避光保藏。 4 质量检查 保藏半年后随机抽取10％保藏物，检查其存活率。 附件：常用保护剂及制备方法 1 常用保护剂类型及种类 1.1 酸性化合物 谷氨酸、天门冬氨酸、苹果酸等 1.2 中性化合物 葡萄糖、乳糖、蔗糖、棉子糖、山梨醇、肌醇等 1.3 高分子物质及其分解物 白蛋白、明胶、各种胨、藻类等 1.4 天然混合物 脱脂乳、血清等 1.5 其它 抗坏血酸、羟胺等 2 保护剂的制备 2.1 脱脂乳的准备 2.1.1 直接采用牛奶作为保护剂时，一般采用离心法去除上层油脂，分装后用高压法灭菌， 高压法一般在116℃灭菌20min，取出后置于37℃保温箱中培养24h 做无菌检验，检验无菌 后置4℃冰箱中备用。 2.1.2 将脱脂奶粉溶于蒸馏水，浓度为20％（W/V），然后116℃高温灭菌15～20min。灭 菌后于37℃培养24h，检查是否灭菌彻底，检验无菌后置4℃冰箱备用。 2.2 10％～20％甘油的准备 加甘油于蒸馏水，配制浓度为10％（V/V）或20％（V/V）的甘油，然后121℃高温灭 菌15～20min，备用（仅用于冻结保藏物的制备）。 |
6楼2008-09-21 15:59:17
