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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » siRNA转染的对照
汕头大学海洋科学接受调剂
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就这样飘

新虫 (初入文坛)

[求助] siRNA转染的对照 已有1人参与

1.Negative control. 2.Hsp70 siRNA
3.Non-silencing siRNA
为什么做两个对照？

发自小木虫Android客户端
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1楼 2015-12-08 20:30:23
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们实验室用RFect sRNA Transfection Reagent，细胞密度在45%左右 ,设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度，每个梯度最好做2个复孔，一般做转染前一天铺板，用来稀释siRNA和稀释转染试剂的培养基必须是无血清培养基，因为血清的存在会干扰siRNA与转染试剂的混合，并且影响转染效率。转染后48h收细胞做qPCR基因水平检测或者转染后72h收细胞提蛋白做western Blotting蛋白水平检测，一般情况设置一个空白组，一个对照组
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3楼2019-04-01 13:50:20
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别踩我的菜

新虫 (小有名气)
这两组的对照还没有做过，siRNA的转染，转染时一定要注意脂质体的毒性,随时观察细胞状态,一旦细胞状态变化要及时终止转染,但转染效率与转染时间有一定的关系,太短的转染时间会导致转不进去而转染失败,如果你的细胞比较耐受,你可以在严密监视细胞的情况下尽量延长转染时间。很多人安利RFECT,或许你可以试试。
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2楼2019-03-22 10:41:48
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