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[交流]
有没有提取小量植物DNA的快速方法
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有1000多棵小麦的幼苗，需要在长大前进行基因型选择以便移苗，因此需要一种小量快速提DNA的方法，尝试过以下两种方法提取植物的DNA，碱液法提取的DNA浓度比较少，没法定量；第二种方法DNA浓度还行，当SDS对Taq酶的活性有影响，PCR的效果不够理想，网友们有没有更好的方法或对这两种方法有所改进?希望不吝赐教，金币奉上 1.碱液法：取10～20mg幼叶,加100μl0.5mol/ LNaOH研磨后,取40 μl研磨液加入200μl 100 mmol/ L Tris HCl pH7.6缓冲液 (或附加0.5% 不溶性聚乙烯吡咯烷酮, PVP )中, 8 000×g离心5min,上清液即可用于PCR反应。 2.快速一步法（ROSE）法提取DNA： 提取缓冲液为1%SDS，10mmol/Ltris,0.3mol/l EDTA,Ph8.0. 剪碎置于管中,同时加入稍许无菌石英砂 ,3滴ROSE提取缓冲液 ,用带玻璃钻头的电钻充分研磨匀浆。加400ul提取缓冲液 ,混匀后置于90℃水浴中 ,不时颠倒摇匀.温育20min后 ,置于冰浴中 ,使组织沉淀 。置于 4℃下保存备用。 |
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6楼2008-09-21 10:29:22
2楼2008-09-20 20:49:10
3楼2008-09-20 21:58:40
lipishun
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 虫号: 485503
- 注册: 2007-12-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
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ntill(金币+5,VIP+0):不错，可以试试，先谢谢啦
ntill(金币+5,VIP+0):不错，可以试试，先谢谢啦
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转基因苗子的初步验证可以参考我这个方法（绝对很快）： 剪取3×3cm的叶片，置于研钵中，加入400微升CTAB快速研磨，转移匀浆至1.5毫升离心管中，加入40微升5M醋酸钾和400微升氯仿，混匀，5000rpm离心10分钟，取上清于新的离心管中，加入2/3体积的异丙醇（或加入2-3倍体积的无水乙醇），混匀，12000rpm离心，沉淀用75%洗1-2次，晾干，加入50微升TE，溶液就可以用作PCR鉴定了了！ 这个是一篇发表于SCI上的，具体的杂志过几天奉上！ 注：在研磨的时候可能有泡沫产生，我以前做的时候有时候先加200微升磨，然后再加200微升捣一下。 [ Last edited by lipishun on 2008-9-30 at 08:58 ] |
4楼2008-09-20 23:37:36