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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 丙酮丁醇梭菌分离纯化
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毛毛---

金虫 (小有名气)

[交流] 丙酮丁醇梭菌分离纯化

请问有没有做过（或类似的产气类厌氧菌）的分离纯化的？想请教一下，万分感谢！！！
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1楼 2015-12-07 16:48:41
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yguang

木虫 (职业作家)
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听说过hungate滚管培养吗，那是最经典的厌氧度也很高的方法，但现在用的或者说会用的人已经极少了，想丙酮丁醇梭菌这种在厌氧箱里接种平板培养即可，如果没有厌氧箱接种了平板放在厌氧罐里培养也行，如果连厌氧罐也没有，那就放在真空干燥器里，反复抽真空通惰性气体（丙丁菌氮气即可，如果厌氧要求高最好充二氧化碳）几次连干燥器一起放入培养箱培养即可。
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毛毛---
22楼2015-12-10 00:42:44
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yguang

木虫 (职业作家)
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23楼: Originally posted by 毛毛--- at 2015-12-14 12:21:42
你好啊，最近正好想了解亨盖特滚管操作，但不知道在哪可以买到？我使用的是厌氧培养盒，放厌氧产气袋，但我的菌平板长得总是不好，平板会被菌产的气吹的很乱，没法做分离纯化都，可以和您交流一下吗？...

不知你是哪里的，北京基本上所有买试剂耗材的公司都可以买到带盖的螺口试管，做滚管关键是要有好的丁基橡胶塞，针扎进去再拔出来针眼会恢复如初，不会漏气才行。按说丙丁菌不用滚管也可以很好的培养，你可以直接放到厌氧罐或真空干燥器里培养，每隔8-12小时把抽气管夹子打开放放气，因为罐内正压，空气不会进去的。
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毛毛---
26楼2015-12-15 01:41:44
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yguang

木虫 (职业作家)
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27楼: Originally posted by 毛毛--- at 2015-12-15 10:06:48
您好，我在合肥这边，您做过丙丁菌吗，能不能留个联系方式交流一下啊...

我在国外，联系方式只能在小木虫了，抱歉！厌氧菌我做过丙丁， 巴斯德梭菌，乳酸菌包括几种很难培养的双岐，丙丁真的算是好培养的，营养要求不苛刻，对温度，pH和氧气要求也不是很苛刻，其实最简单而且经济实惠的方法就是平板放真空干燥器里培养，对大部分厌氧菌可行。还有一个方法就是把平板放在大的烧杯或广口瓶子里，在胶塞或盖子上打两个孔，一个进气一个出气，进气管要插到底，出气管在盖子附近就行，出气管末端可接一杯水，根据气泡来判断气量，培养过程中一直通惰性气或者前期通气等菌自己产气后夹住进气管，因为出气管有水封且菌产气能保持培养容器内正压所以不用担心氧气进去。你先试试这两种方法，滚管操作比较麻烦，而且没人教你会很难上手，一般来说不是对氧气极度敏感的菌没必要用滚管的。另外培养厌氧菌一般都会在培养基里加一点指示剂（如刃天青），如果培养基进氧了就会变色的，这个你应该知道吧？
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31楼2015-12-15 23:46:41
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yguang

木虫 (职业作家)
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引用回帖:
32楼: Originally posted by 毛毛--- at 2015-12-16 08:43:29
我是用厌氧培养盒培养的，就是盒子是封闭的，放了一包厌氧产气袋进去，但是我培养的平板菌生物量都很低，很难形成明显菌落，会不会是氧气影响啊，因为我在操作过程中是接触氧气的，没有厌氧手套箱...

你接平板用的什么？如果是螺口管液体或厌氧瓶液体，马上涂板应该没问题，但你应该不是这样吧？你还是赶紧买点螺口管或者血清瓶也可以，建立一套合适的培养方法，否则既浪费时间实验也做不好！
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33楼2015-12-17 02:37:43
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