| 查看: 1962 | 回复: 4 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
淘七九懒铁杆木虫 (著名写手)
|
[交流]
一步克隆法随机建库！急求大神帮忙！！！
|
||
| 情况：最近在用蛋白工程的相关工作，主要是做建立随机突变文库，我用的易错PCR扩增的目的条带，引物是用诺唯赞的一步克隆法试剂盒相关软件设计的，引物应该没有问题，在做易错PCR的时候，我改变的是Mg2+、Mn2+的浓度，然后载体用的是我之前构建好的，带有目的片段的B-pet28载体，然后双酶切(BamHI/XhoI)获得线性的pet28,连接的时候先估测浓度，按照说明书上加的，转入BL21后卡那板上根本就不长或者就一两个。现在我正在努力找原因，希望有用过一步克隆法试剂盒的人提供些帮助，给些建议，多谢多谢啦 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有149人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
淘七九懒
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 8417.9
- 散金: 101
- 红花: 18
- 帖子: 1017
- 在线: 255小时
- 虫号: 1992869
- 注册: 2012-09-11
- 性别: GG
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
4楼2016-01-25 21:01:25
janjanjanjan
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 362.1
- 红花: 1
- 帖子: 13
- 在线: 6.7小时
- 虫号: 3241611
- 注册: 2014-05-29
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2016-01-24 20:19:47
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
你好，我想问一下米的问题解决了吗？酶切，连接以后是直接电转到你的宿主菌里了吗？我现在也在做突变建库，连接后产物直接电转效率并不好。想请问有什么建议吗？ 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-11-18 10:43:53
6