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淘七九懒铁杆木虫 (著名写手)
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[交流]
一步克隆法随机建库！急求大神帮忙！！！
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| 情况：最近在用蛋白工程的相关工作，主要是做建立随机突变文库，我用的易错PCR扩增的目的条带，引物是用诺唯赞的一步克隆法试剂盒相关软件设计的，引物应该没有问题，在做易错PCR的时候，我改变的是Mg2+、Mn2+的浓度，然后载体用的是我之前构建好的，带有目的片段的B-pet28载体，然后双酶切(BamHI/XhoI)获得线性的pet28,连接的时候先估测浓度，按照说明书上加的，转入BL21后卡那板上根本就不长或者就一两个。现在我正在努力找原因，希望有用过一步克隆法试剂盒的人提供些帮助，给些建议，多谢多谢啦 |
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淘七九懒
铁杆木虫 (著名写手)
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4楼2016-01-25 21:01:25
janjanjanjan
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3楼2016-01-24 20:19:47
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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你好，我想问一下米的问题解决了吗？酶切，连接以后是直接电转到你的宿主菌里了吗？我现在也在做突变建库，连接后产物直接电转效率并不好。想请问有什么建议吗？ 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-11-18 10:43:53