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毕赤酵母GS115分泌表达不出目的蛋白 已有1人参与
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我是用GS115表达一个有3对二硫键的蛋白,分子量19KD,用4L BMMY诱导7天,纯化后超滤浓缩至5ml,跑SDS-PAGE胶后看不到目的条带,做Western blot后也没看到明显的条带。以前提取基因组做PCR和测序是正确的。 想问下各位对于酵母表达含二硫键的蛋白有什么经验吗？是真的很难表达出来吗？我BMMY诱导的ph是6.0，这个ph合适吗? 另外还想问下为什么我刚处理完的培养基的SDS-PAGE样品的颜色和状态是澄清正常的,放了两天之后就会出现沉淀,且用含沉淀的样品点样之后跑出来的胶上面每个泳道都会有痕迹?(如图)  2015-04-30 ECD镍柱C18柱纯化胶图.JPG |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 可能楼主的酵母真核表达系统里的二硫键异构酶与你的目的蛋白所需的同源性不高，毕赤酵母属体系表达的蛋白缺少正确的折叠，无法形成天然结构。楼主可看融合融合表达含二硫键蛋白质的方法 |
3楼2015-12-04 10:10:25
4楼2015-12-08 14:52:43