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蛋白质含量怎么测定？ 5个金币限9月20日
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鸡尾虾
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http://www.5ibio.com/html/protein/proteinpur/20061225/2201.html 介绍的比较详细 你可以根据自己实验室的条件选择方法。 我推荐用凯氏定氮法，方法经典准确，我一直使用这个方法测肉中蛋白质含量。 |
2楼2008-09-19 11:19:30
凯氏定氮煮的时间太长了吧
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实验室一般用BCA法 Modulus™ Method for BCA Protein Assay 1.引言 Turner BioSystems公司的仪器结合Pierce的BCA蛋白分析试剂盒，可以在大范围内提供一个简单的蛋白定量方法。BCA方法通过在碱性环境中蛋白将Cu+2 还原为Cu+1 。Cu+1 和BCA结合生成一种紫色的产物，在562nm有吸收峰。生成总的产物和样品中蛋白量有关。 在蛋白分析中我们必须考虑不同的蛋白颜色反映不同。温度、去污剂、盐和不同的缓冲液成分也会影响分析。在进行试验之前参看BCA分析试剂盒提供的文献得到更多信息。 在此仪器中应用吸收模块和BCA分析试剂盒进行蛋白定量时需要牛血清白蛋白最小的量是5 µg/mL（图1），最大是2 mg/mL（图2）。增强操作程序要求60°C孵育30分钟。标准操作程序要求37°C孵育30分钟，或室温孵育2小时。 图1. BCA 在仪器的吸收模块用560NM滤光垫使用增强操作程序分析。在 60°C孵育 30分钟后，在仪器分析之前室温冷却。 Figure 2. BCA标准品 在仪器的吸收模块用560NM滤光垫使用增强操作程序分析。 在 37°C孵育30分钟后，在仪器分析之前在室温冷却。 2. 材料 • 仪器(P/N 9200-000 或 9200-002) • 吸收模块(P/N 9200-050) • 560 nm 滤光垫 (P/N 9200-051) • 10 x 10 mm 处理得甲基丙烯酰酯比色杯(7000-959) • BCA蛋白分析试剂盒(Pierce 货号 #'s 23225 and 23227) 3. 制备 注意: 在室温保存试剂盒。 3.1 BSA 标准曲线 在微型离心管中，制备连续稀释的BSA ，覆盖选择操作程序的工作范围。例如，两倍连续稀释2000 µg/mL到31.25 µg/mL适合标准操作程序。在制备标准曲线中确保包括空白溶液。 注意：在和样品相同的样品缓冲液中制备系列稀释的样品以达到最佳结果。 3.2 工作试剂(WR) 确定所要求中体积。每个样品和标准品需要2 mL的WR。通过混合50份的 BCA试剂 A和 1份的BCA 试剂B制备工作液。反复混合。工作液在室温能稳定48小时。 3.3 样品 3.3.1 在标记的试管中加0.1 mL标准品和样品。 3.3.2在每个管中加入2.0 mL 的WR，反复混合。 3.3.3a在37°C 水浴中孵育试管30分钟或室温2 小时，标准的操作程序。3.3.3b 60°C 水浴中孵育 30分钟。 注意: 不能使用压差孵育器。压差孵育器不平衡的热量转移在分析中可能造成严重的错误。 3.3.4 室温冷却所有的试管。 3.4 仪器设置 3.4.1 关闭电源。根据操作手册安装吸收模块。 3.4.2 打开仪器，通过触摸屏确认吸收模块已经安装。 3.4.3 点击 "Calibrate" 并使用空白比色杯设置仪器，设置模块来校正仪器读数为零。 3.4.4 使用装有2 ml 超纯水的比色杯来校正基线读数(100% 透射)。 3.4.5 点击"OK"接受校正并返回住屏幕。 4. 样品分析 4.1 将每个样品和标准品转移到 10 x 10 mm比色杯中。 4.2 将比设备插入到仪器中，点击 "Measure Absorbance"测定吸收，开始测定。 注意: BCA 分析不能达到端点。在室温，反应的终颜色在一定时间内会缓慢变色。建议在10分钟内读取所有样品和标准品。 4.3 在吸收单位(Ab)内记录数据。 4.4 用标准曲线确定未知样品蛋白浓度。四个参数 (quadratic)或最合适的曲线能提供最精确结果。 |
3楼2008-09-19 11:23:58
raindrop8316
金虫 (正式写手)
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4楼2008-09-19 11:24:23
5楼2008-09-19 16:00:06
huangjh160
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7楼2008-09-19 18:18:03
