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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 关于pcr
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sunmaocai

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助 关于pcr

为什么有的pcr用DMSO,有的用氯化镁，有什么区别？
聚合酶是不是一定要在预变性后加？
如果用菌液做，要多少量？
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1楼 2008-09-19 09:54:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
sunmaocai(金币+5,VIP+0):谢谢
Mg2+是Taq酶的辅因子，没有Mg2+就P不动
DMSO是帮助打开具有复杂二级结构（如GC比很高或者碱基组成比较诡异的片段）用的，也具有一定的提高特异性的功能，但也有可能抑制Taq的活性
聚合酶为什么要预变性后加？现在不都是热稳定的么……又不是PCR刚出来那十年间……
菌液不大清楚，看你的浓度如何
菌液PCR假阳性高，建议抽了质粒再做
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2楼2008-09-19 10:06:53
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kangkang997

金虫 (小有名气)
我上次做菌液PCR50微升体系里也是加2微升的菌液
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3楼2008-09-19 12:31:16
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
dmso是一种增强剂 适用于gc含量高的模板
菌液pcr的话 20ul加一ul就可以了
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4楼2008-09-19 15:55:51
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