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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 微生物发酵液可以直接上HPLC吗？
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slwr

铜虫 (小有名气)

[求助] 微生物发酵液可以直接上HPLC吗？ 已有7人参与

本人实验中主要是研究微生物代谢物的活性，培养好的发酵液需要对活性物质进行物质鉴定。我是用乙酸乙酯萃取发酵液然后溶解在甲醇中，直接上液相色谱。是制备柱，流动相40%甲醇，5ml/min, 紫外检测波长为245nm,出来的峰图如下。这样是不是不好再分开了？我看好多文章都要先过柱子再上液相。我不是专门做化学分析，对于过柱子，液相这块懂的特别少。我就想问下各位专家如果代谢物种类比较少，像我这样不经过过柱子直接上液相可以吗？如果可以，出现这样的峰图该怎么再将各个峰分开呢？如果不可以，请各位给我指点下最基本过柱子的步骤，需要怎么选择柱子和用什么流动相冲洗呢？十分感谢！

微生物发酵液可以直接上HPLC吗？


微生物发酵液可以直接上HPLC吗？-1
1.jpg.png
微生物发酵液可以直接上HPLC吗？-2
1.jpg
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1楼 2015-12-01 16:42:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Project D

新虫 (小有名气)
★ ★
slwr(200782060代发): 金币+2, 感谢交流 2015-12-10 10:14:47
不过柱子的话，至少将提取夜用旋转蒸发仪蒸干，再用甲醇溶，进样前再过滤一下，这样杂质除的比较干净

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2楼2015-12-01 17:54:14
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slwr

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Project  D at 2015-12-01 17:54:14
不过柱子的话，至少将提取夜用旋转蒸发仪蒸干，再用甲醇溶，进样前再过滤一下，这样杂质除的比较干净

是，旋转蒸干后溶解，进样前过了0.22的滤膜除杂质。
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3楼2015-12-01 21:22:11
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纯净水5256

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该用甲醇泡一下，杀菌

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4楼2015-12-01 21:24:17
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slwr

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 纯净水5256 at 2015-12-01 21:24:17
应该用甲醇泡一下，杀菌

能具体些吗？我老师就给了我几个C18 sep park柱子（waters, 5g）,我都不知道该从哪里下手准备。有没有比较基础有用的资料或参考资料？能给我发过来一些吗？我没做过，一头雾水。
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5楼2015-12-01 21:44:38
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智智药

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
slwr(200782060代发): 金币+3, 感谢交流 2015-12-10 10:15:00
过柱子是为了把杂志分离出来，如果单纯的作分析的话，最好要过一次柱子。我看你的图，组分都在前面，你应该用的反向色谱柱吧？可以尝试换一下流动相，梯度洗脱，效果会好点。可以把组分分开再走一遍色谱。
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6楼2015-12-02 09:14:56
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slwr

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 智智药 at 2015-12-02 09:14:56
过柱子是为了把杂志分离出来，如果单纯的作分析的话，最好要过一次柱子。我看你的图，组分都在前面，你应该用的反向色谱柱吧？可以尝试换一下流动相，梯度洗脱，效果会好点。可以把组分分开再走一遍色谱。

换流动相换哪些比较好呢？还是还用甲醇和水，换成梯度洗脱？
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7楼2015-12-02 11:29:30
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
slwr: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-12-02 16:31:46
SepPak 是固相萃取 (SPE ) 的小柱。一般用来净化样品，除去强吸附的组分。通常用法是先用甲醇冲洗，再用水冲洗， 再上样，再用水或低比例的水-有机相混合液洗，最后用高比例有机相洗脱。

感觉你的制备柱有些老化。最好找个标准测试样品测一下柱效。
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8楼2015-12-02 14:25:34
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智智药

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
slwr: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-12-02 16:32:13
引用回帖:
7楼: Originally posted by slwr at 2015-12-02 11:29:30
换流动相换哪些比较好呢？还是还用甲醇和水，换成梯度洗脱？...

你前面的组分，极性比较大，基线不稳，需要梯度洗脱。流动相跟你的样品有关，具体换成什么，你们自己考虑。
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9楼2015-12-02 15:24:07
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
slwr: 金币+1, ★有帮助 2015-12-02 16:32:58
具体看你的目标物了，但是前提是过膜，一定要过膜
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10楼2015-12-02 15:36:03
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