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slwr

铜虫 (小有名气)

[求助] 微生物发酵液可以直接上HPLC吗? 已有7人参与

本人实验中主要是研究微生物代谢物的活性,培养好的发酵液需要对活性物质进行物质鉴定。我是用乙酸乙酯萃取发酵液然后溶解在甲醇中,直接上液相色谱。是制备柱,流动相40%甲醇,5ml/min, 紫外检测波长为245nm,出来的峰图如下。这样是不是不好再分开了?我看好多文章都要先过柱子再上液相。我不是专门做化学分析,对于过柱子,液相这块懂的特别少。我就想问下各位专家如果代谢物种类比较少,像我这样不经过过柱子直接上液相可以吗?如果可以,出现这样的峰图该怎么再将各个峰分开呢?如果不可以,请各位给我指点下最基本过柱子的步骤,需要怎么选择柱子和用什么流动相冲洗呢?十分感谢!

微生物发酵液可以直接上HPLC吗?


微生物发酵液可以直接上HPLC吗?-1
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微生物发酵液可以直接上HPLC吗?-2
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Project D

新虫 (小有名气)

★ ★
slwr(200782060代发): 金币+2, 感谢交流 2015-12-10 10:14:47
不过柱子的话,至少将提取夜用旋转蒸发仪蒸干,再用甲醇溶,进样前再过滤一下,这样杂质除的比较干净

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-01 17:54:14
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slwr

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Project  D at 2015-12-01 17:54:14
不过柱子的话,至少将提取夜用旋转蒸发仪蒸干,再用甲醇溶,进样前再过滤一下,这样杂质除的比较干净

是,旋转蒸干后溶解,进样前过了0.22的滤膜除杂质。
3楼2015-12-01 21:22:11
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纯净水5256

至尊木虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该用甲醇泡一下,杀菌

发自小木虫IOS客户端
4楼2015-12-01 21:24:17
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slwr

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 纯净水5256 at 2015-12-01 21:24:17
应该用甲醇泡一下,杀菌

能具体些吗?我老师就给了我几个C18 sep park柱子(waters, 5g),我都不知道该从哪里下手准备。有没有比较基础有用的资料或参考资料?能给我发过来一些吗?我没做过,一头雾水。
5楼2015-12-01 21:44:38
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智智药

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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slwr(200782060代发): 金币+3, 感谢交流 2015-12-10 10:15:00
过柱子是为了把杂志分离出来,如果单纯的作分析的话,最好要过一次柱子。我看你的图,组分都在前面,你应该用的反向色谱柱吧?可以尝试换一下流动相,梯度洗脱,效果会好点。可以把组分分开再走一遍色谱。
6楼2015-12-02 09:14:56
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slwr

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 智智药 at 2015-12-02 09:14:56
过柱子是为了把杂志分离出来,如果单纯的作分析的话,最好要过一次柱子。我看你的图,组分都在前面,你应该用的反向色谱柱吧?可以尝试换一下流动相,梯度洗脱,效果会好点。可以把组分分开再走一遍色谱。

换流动相换哪些比较好呢?还是还用甲醇和水,换成梯度洗脱?
7楼2015-12-02 11:29:30
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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slwr: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-12-02 16:31:46
SepPak 是固相萃取 (SPE ) 的小柱。一般用来净化样品,除去强吸附的组分。通常用法是先用甲醇冲洗,再用水冲洗, 再上样,再用水或低比例的水-有机相混合液洗,最后用高比例有机相洗脱。

感觉你的制备柱有些老化。最好找个标准测试样品测一下柱效。
8楼2015-12-02 14:25:34
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智智药

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
slwr: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-12-02 16:32:13
引用回帖:
7楼: Originally posted by slwr at 2015-12-02 11:29:30
换流动相换哪些比较好呢?还是还用甲醇和水,换成梯度洗脱?...

你前面的组分,极性比较大,基线不稳,需要梯度洗脱。流动相跟你的样品有关,具体换成什么,你们自己考虑。
9楼2015-12-02 15:24:07
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖


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slwr: 金币+1, 有帮助 2015-12-02 16:32:58
具体看你的目标物了,但是前提是过膜,一定要过膜
10楼2015-12-02 15:36:03
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