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lovehejuhua银虫 (小有名气)
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枯草芽孢杆菌6633 电击转化，求高手指点 已有1人参与
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宿主菌ATC6633，质粒为构建的PHY300PLK重组质粒（低拷贝，该质粒为大肠-枯草穿梭质粒），大小约10kb. 电击转化。 培养基，电转培养基和复苏培养基都跟正常的一样（山梨醇，甘露醇，OD=0.8）。-80隔夜存放后进行点击，电击条件 2mm 2.3-2.5kv。电转时间基本都在5.0以上，37度复苏3 h后涂板，隔夜不长菌，大概至少要过24 h后才会长出菌落，菌落形态 边缘不规则，应该就是枯草芽孢杆菌，可是转接摇管后加入相应抗性仍旧不长，好郁闷，做了3个礼拜了。 抗性用的是四环素抗性，添加量20。不知道到底哪步出了问题。 感受态重新做了好多次，有个比较奇怪的现象是每次第一次加入电转培养基后感觉菌体是比较粘稠的，可以拉丝，因此离心特别难离下来，一不小心就会把菌体连着上清一起倒掉了，最近这次做的时候只能多离一会儿。。。不知道是不是和这个有关系。 质粒也重新提过，浓度应该也是够的。 镜检的时候发现这个6633比我之前做过的其他枯草杆菌细很多，之前做的镜检状态都是比较粗壮的杆状，这个镜检看着就特别特别细 求高手指点。。谢谢各位了 |
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lovehejuhua: 金币+20 2015-12-07 11:10:08
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lovehejuhua: 金币+20 2015-12-07 11:10:08
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应该都是假阳性菌落，建议复苏时间加长到8,10小时 发自小木虫Android客户端 |
2楼2015-12-01 19:29:24
lovehejuhua
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