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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » SOE–PCR做基因敲除，新手求指教。
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岳大白

新虫 (初入文坛)

[求助] SOE–PCR做基因敲除，新手求指教。 已有1人参与

上下游同源臂，和中间的抗性基因已经得到，目前遇到的问题是三个基因混合，PCR时链接不上，到底是哪里的问题呢？我用的primer star max 酶，引物设计时有15bp的overlap，三个基因的混合比例也试过几次。

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1楼 2015-12-01 10:36:44
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Heao_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 岳大白 at 2015-12-01 10:36:44
上下游同源臂，和中间的抗性基因已经得到，目前遇到的问题是三个基因混合，PCR时链接不上，到底是哪里的问题呢？我用的primer star max 酶，引物设计时有15bp的overlap，三个基因的混合比例也试过几次。
...

PCR最好用三步法，前几次的退火温度要低一些。

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2楼2015-12-01 16:29:26
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同源臂加长到25bp，另外无引物过夜处理，然后再PCR
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3楼2015-12-01 16:54:16
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岳大白

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2015-12-01 16:54:16
同源臂加长到25bp，另外无引物过夜处理，然后再PCR

怎么过夜处理？什么条件呢？

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4楼2015-12-01 16:57:17
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