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肉中提取核苷酸(如ADP,IMP,肌苷等)用什么柱子（季铵盐，氨丙基或者其他）纯化比较好已有1人参与
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| 要用毛细电泳分析猪肉中的几种核苷酸及降解产物的含量，现在标品已经分开了，但是样品里的几种核苷酸及降解产物不知道是含量太少还是没有，感觉没有一个和标品能对上的，而且样品里有很大个杂质峰，那些杂质怎样才能除去，又能分析出我所需要的目标产物啊，需要用那些柱子前处理萃取吗？ |
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2楼2015-12-05 15:23:35
【答案】应助回帖
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如果不行，你可以考虑换个设备参考我们之前的方法： 1.3.3 HPLC测定ATP、ADP、AMP以及IMP 宰后肌肉中ATP、ADP、AMP以及IMP的含量变化通过HPLC来测定。从液氮中取800mg冷冻样，加入3mL7%高氯酸（PCA）中匀浆，15000g离心10min，上清液用1.44mL 0.85 M K2CO3 中和，15000g离心10min，0.2 µm滤膜过滤。ATP,ADP,AMP,IMP的含量在Agilent 1100色谱仪上进行测定，检测波长254nm，色谱柱使用反相C18色谱柱(Zorbax SB 4 mm × 250 mm, 5 μm 粒径, Agilent公司)，流速1ml/min。流动相 A为磷酸缓冲液（2.5mM 四丁基硫酸氢铵，0.04M磷酸二氢钾，0.0M磷酸氢二钾，pH 7.0）。流动相B为甲醇。洗脱程序如表1- 1。核苷酸测定结果最后采用外标法，通过保留时间和峰面积对核苷酸进行定性和定量分析。 得到结果如下： 2.3宰后牛骨骼肌细胞能量水平的变化 如图1-10所示，四种核苷酸在本研究的保留时间分别为：IMP，4.8min；AMP，8.6min；ADP，15.2min；ATP，19.3min。肌肉样品中核苷酸类物质根据混合标样中各物质的保留时间被识别出来，如图1-11所示。核苷酸类物质测定过程中定量分析参数设定及回归方程如表1-2所示。 |
3楼2015-12-05 15:29:20