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用高效液相色谱技术测定蕨类植物—翠云草花色素苷和叶绿素种类和含量,方案是否可行?
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花色素苷:采集翠云草叶片,用流水冲洗干净,真空冷冻干燥72小时研磨成粉备用。称取1.00 g 粉末, 用体积分数为1%的甲醇盐酸(97.0 mL 甲醇+ 3.0 mL体积分数为36%的盐酸)萃取, 定容至25.0 mL,完全遮光后放置在4 ℃冰箱冷藏室中萃取24 h, 将上清转入新的容器中4℃遮光保存,再向残渣中加入25.0 mL甲醇盐酸,相同条件下萃取12 h,重复该操作2次,将3次萃取液的上清合并,旋转蒸发仪浓缩后用甲醇盐酸定容至25.0 mL。{吸取600.0 μL甲醇盐酸萃取液与750.0 μL 的2.0 mol·L-1 盐酸混匀,恒温(95 ℃)加热45 min。加热后迅速冰上冷却,加入370.0μL异戊醇剧烈震荡混匀,4 ℃下6 000 r min-1 离心5 min,待混合液分层后,将上相移至新的离心管中用于检测。} 注:括号内为水解过程 叶绿素:先称取0.50 g 粉末, 再用体积分数为90%丙酮溶液[V(丙酮)∶V(乙醇)=9∶1]萃取并定容至20.0 mL, 然后放置于4℃冰箱冷藏室萃取48 h。 高效液相色谱—二级管阵列检测法(HPLC-DAD):所用高效液相色谱仪(L-2000)选用L-2455 型二极管阵列检测器进行检测。仪器参数: C18 柱, 柱温40℃, 进样量10.0μL, 流速0.50 mL·min-1, 检测波长为280 nm, 520 nm, 535 nm, 540 nm。流动相参数: A 为体积分数为0.05%的甲酸水溶液, B为色谱级乙腈。梯度洗脱程序为: 0~40 min, A 95%~0, B 5%~100%; 40~60 min, A 0,B100%。 |
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