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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 没有酶切位点怎么把质粒上的一段序列删除呢
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busen

铁虫 (初入文坛)

[交流] 没有酶切位点怎么把质粒上的一段序列删除呢 已有9人参与

构建了一个大质粒，需要删除里面2000bp的一个小片段，但是片段两端没有酶切位点，怎么能把这片段直接删除呢
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1楼 2015-11-22 14:51:50
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象山山蒙泉水
PCR

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-22 15:06:41
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风随心动

铜虫 (小有名气)
★
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1、PCR
2、Red重组
3、酶切酶连
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偶见繁星梦九天，只愿沧海桑田始如先。
3楼2015-11-22 15:42:34
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卢雪欢

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
利用PCR技术先获取需要片段，然后采用SOE技术进行拼接。
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爱药学，学习中
4楼2015-11-22 19:09:09
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luweidong401

金虫 (著名写手)
PCR设计引物时可以人为引入酶切位点，然后SOE

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5楼2015-11-23 07:59:34
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51mimi

新虫 (小有名气)
★
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设计相应引物，PCR就可以了

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6楼2015-11-23 08:02:08
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★
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RED技术可以对任意大小的DNA的任意位点进行插入、删除、突变等操作，原理是基于短同源臂的同源重组。我有RED的质粒。
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7楼2015-11-23 13:40:35
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xushiqi001

新虫 (小有名气)
★
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在你要敲除的序列两端设计一对引物反向扩增载体就可以了啊，当然，可能会很大，酶要选好。

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8楼2015-11-23 14:44:30
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wpwrn

银虫 (初入文坛)
★
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诺唯赞点突变试剂盒不依赖于酶切位点可以对位点进行插入、删除、突变
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联系方式QQ:350479708
9楼2015-11-23 15:53:00
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flyingsky305

新虫 (小有名气)
★
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可以买无缝克隆试剂盒。我估计里面也是含有前面同学提到的red酶

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10楼2015-11-23 15:58:21
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