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为什么IgG刺激巨噬细胞后不产生TNFα？急
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我的实验是想利用FcγR来刺激巨噬细胞产生TNFα。但是实验做了一个月都没有进展，现在很着急，请各位大神支招。 实验过程如下：小鼠提前3-4天腹腔注射1ml淀粉肉汤培养基，实验前禁食一晚，第二天分离小鼠腹腔巨噬细胞。实验中设立的LPS对照组，顺利的刺激巨噬细胞产生了大量的TNFα。但是FcγR配体也就是小鼠IgG组却不能刺激产生TNFα。小鼠IgG是提前包被到96孔板的，37度包被过夜。IgG购自sigma,96孔板是高结合力的板和普通的细胞培养板都尝试过，全部失败。 包被的IgG刺激巨噬细胞产生TNFα，这类实验文献中有不少人做成功了，不知道为什么我做不出来？难道是IgG不好用吗？ps:文献中也没有标注用个哪个货号品牌，有些甚至还是自己纯化的IgG. 最后想请教大家，用0.22um过滤IgG可以吗，因为是要刺激细胞，所以避免污染就给过滤了，难道是滤膜吸附了很多IgG导致实际浓度损失很大造成的？ 有做过相似实验的大神吗？请帮帮我吧。感激不尽~我是新手还没有太多金币，但很是很感谢对实验提出建议的各位  |
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