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我也正在做这个
这是我给老大的试验方案
不知道对你有没有用
我们是海泥，所以要加盐，你的不要加盐
海泥样品的处理
1、 细菌
文献中具有代表性的方法有：
（1）取10 g盐泥加50 mL无菌生理盐水，用3O℃ ，130 r／min的摇床培养30 min，过滤取上清，得到的上清液用筛选培养基筛选，用3O℃ ，130 r／min，摇床培养48 h，涂平板，3O℃ ，培养2～3 d后，挑选培养基上生长出的单菌落，再涂平板分离纯化，直至在显微镜下镜检菌体形态一致。一株耐盐菌DL41诱导合成Ectoine及海藻糖的研究
赵艳平 ， 郎亚军 ， 张苓花
(1．大连工业大学生物与食品工程学院，辽宁大连 116034；
2．大连海事大学环境科学与工程学院，辽宁大连 116024)
（2）将采集的土壤样品加入生理盐水，3O℃下振荡30 min，300r／min离心，取上清液；将上清液接入培养基，3O℃下培养48 h后，分别接入含有不同浓度NaC1的培养基中，继续培养48 h；将培养液
涂布在相应NaC1浓度的固体平板上，3O℃ 培养，将长出的单菌落重复分离，直至获取纯菌。
再根据对嗜盐菌的定义：：(1)极端嗜盐菌(extreme halophiles)，其最适生长盐度为15~30 (W／V)NaC1；(2)中度嗜盐菌(moderate halophiles)，最适生长盐度为5～2O (W／V)NaCI(3)海洋细菌(marine bacteria)，能够生长在与海水盐度相当的培养基中；(4)
非嗜盐菌(nonhalopholies)，它们在盐度低的培养基中生活更好。
拟采取的分离方法是：
（1） 培养基：LB营养琼脂培养基（基本）
分别添加0、3.5%、5%、10%、15%、20% (W／V) )NaCI作为筛选的培养基。
（2）方法：取10 g盐泥加50 mL无菌生理盐水，用3O℃ ，130 r／min的摇床培养30 min，300r／min离心，取上清液；得到的上清液用筛选培养基筛选，用3O℃ ，130 r／min，摇床培养48 h，涂平板，3O℃ ，培养2～3 d后，挑选培养基上生长出的单菌落，涂布在相应NaC1浓度的固体平板上，3O℃ 培养，将长出的单菌落重复分离，直至获取纯菌。
2、放线菌
（1）培养基
高氏一号培养基：可溶性淀粉 20g ，KNO3 1g，NaCl 0.5g ，K2HPO4 0.5g，MgSO4•7H20 0.5g，FeSO4 •7H20 0.01g，50%海水定容1000ml, 琼脂 18g，pH 7.2～7.4）加入75µg/ml K2Cr2O7作为抑菌剂。
（2）方法：将泥样用无菌人工海水稀释到10%，40℃, 振荡 20min;取泥液均匀地涂布在高氏一号培养基上，待菌落长出以后，挑取菌落在相应的培养基上划线纯化。（这是我师妹他们采用的方法，据说是试过很多种方法以后，觉得比较好的，但是菌落较密）
拟采用的方法：
（1）培养基：基本高斯一号培养基，分别用50%和100%的人工海水配制。
（2）方法：
将泥样用无菌人工海水稀释到2.5%、5%、10%，40℃, 振荡 20min;取泥液均匀地涂布在两种高氏一号培养基上，待菌落长出以后，挑取菌落在相应的培养基上划线纯化。
3、 真菌
文献报道土壤中真菌分离的较少。
结合放线菌分离的方法，拟采用的方法是：
（1）培养基：普通PDA培养基，分别用无菌水、50%和100%的人工海水配制。
（2）方法：将泥样用无菌人工海水稀释到2.5%、5%、10%，40℃, 振荡 20min;取泥液均匀地涂布在三种不同浓度人工海水配制的PDA培养基上，待菌落长出以后，挑取菌落在相应的培养基上划线纯化。 |
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085404电子信息284分求调剂
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