应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 融合蛋白表达时会不会只有标签表达，我的质粒构建木有问题，
101/1返回列表
查看: 2789  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yuanxiaoxin

新虫 (初入文坛)

[求助] 融合蛋白表达时会不会只有标签表达，我的质粒构建木有问题， 已有3人参与

融合蛋白表达会不会只有标签表达，我的质粒构建木有问题，测过序，且目的片段与标签之间木有终止密码子，但是过完镍柱纯化后只有标签表达了，各位大神，可否遇到过这种问题啊。。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-21 10:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.二级翻译起始位点。这种情况见于你的序列里正好含有和核糖体结合位点完全一致的序列。那就怪不得人家了，核糖体会很高兴地找到这个位点，然后开始翻译，致使你的蛋白不表达。
2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，可能需要真核表达系统，或者要先切内含子才能表达。因此，当你的蛋白没有表达出来时，可以考虑更换宿主菌。
赞一下 回复此楼
我好累，承受这个年纪不该有的帅！
2楼2015-11-23 10:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿枫隽

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
镍柱说明是用的組氨酸标签了，一共2kDa，你怎么判断只有标签……信息不够吧，是不是带了其他标签，有时候蛋白太大了，在大肠杆菌里是不表达或者表达量极低的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-23 11:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanxiaoxin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 绿枫隽 at 2015-11-23 11:15:38
镍柱说明是用的組氨酸标签了，一共2kDa，你怎么判断只有标签……信息不够吧，是不是带了其他标签，有时候蛋白太大了，在大肠杆菌里是不表达或者表达量极低的

是的，带了其他的标签，27KDa
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-23 12:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是如何判断表达不表达的啊，诱导前后SDS-PAGE比较，序列没问题，标签表达了，目的应该也会表达。祝顺利哦
赞一下 回复此楼
5楼2015-11-23 13:32:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanxiaoxin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 总有二狗咬朕 at 2015-11-23 10:16:42
1.二级翻译起始位点。这种情况见于你的序列里正好含有和核糖体结合位点完全一致的序列。那就怪不得人家了，核糖体会很高兴地找到这个位点，然后开始翻译，致使你的蛋白不表达。
2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基 ...

标签是在目的基因的前面啊可是，不该顺着劲儿就表达下来了么
赞一下 回复此楼
6楼2015-11-23 16:53:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿枫隽

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by yuanxiaoxin at 2015-11-23 12:33:24
是的，带了其他的标签，27KDa...

有时候会提前终止的，建议你换个载体，试试GST或者sumo 或者mbp标签……或者换个表达体系，试试昆虫或者哺乳细胞……

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2015-11-24 01:06:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
过完镍柱纯化只有标签蛋白不是很好嘛，没有杂蛋白
赞一下 回复此楼
8楼2015-11-26 11:42:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mataomatao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2015-11-28 23:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小细胞啊

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by MarchZR at 2015-11-26 11:42:28
过完镍柱纯化只有标签蛋白不是很好嘛，没有杂蛋白

她的意思是只有tag没有目的蛋白

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-11-28 23:43:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuanxiaoxin 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[材料工程] 材料调剂推荐 +9 蛋糕x2 2026-04-07 9/450 2026-04-13 09:07 by lhj2009
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所，有机化学356分找调剂 +12 Nadiums 2026-04-09 12/600 2026-04-13 08:50 by lhj2009
[考研] 071000生物学，一志愿深圳大学296分，求调剂 +13 TIckLw 2026-04-06 14/700 2026-04-13 08:49 by 可淡不可忘
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +30 xaw. 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 08:42 by Sammy2
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+4 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 18/900 2026-04-13 01:17 by 幸免 ..
[考研] 272分材料子求调剂 +40 Loy0361 2026-04-10 52/2600 2026-04-12 19:23 by laoshidan
[考研] 一志愿厦大0856，306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[考研] 085500求调剂材料 +10 易11122 2026-04-09 10/500 2026-04-11 10:39 by maddjdld
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 274求调剂 +5 山阿蔓 2026-04-07 5/250 2026-04-09 15:28 by 18828373951
[考研] 308求调剂 +17 墨墨漠 2026-04-06 17/850 2026-04-09 09:25 by 壹往無前
[考研] 286求调剂 +19 Faune 2026-04-08 20/1000 2026-04-09 08:36 by 哦哦123
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:00 by hemengdong
[考研] 生物学363调剂求助 +7 fanzhang6666 2026-04-06 9/450 2026-04-07 17:37 by lijunpoly
[考研] 22408 318分求调剂 +4 勤奋的小笼包 2026-04-06 6/300 2026-04-07 15:05 by 纸鹤555
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭