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open酱之歌

铁虫 (小有名气)

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[交流] 关于肿瘤干细胞培养的问题

本人最近在做肿瘤干细胞成团实验。从乳腺癌231细胞系分离干细胞。可是分离出来之后老是养不活，想请教一下养过肿瘤干细胞的虫友一些问题。
原先我们231细胞系的培养条件是：L15培养基+10%FBS
筛选干细胞的靶标是LADH+，每次能筛选到的细胞比例是3%左右。
筛选回来之后培养在低粘附六孔板上。培养基是DMEM/F12加胰岛素，EGF，bFGF,B27,氢化可的松等生长因子。无血清37℃隔绝空气培养。
每次到第二天的时候就会发现板上全是一个个类似细胞碎片的颗粒状物质，细胞颜色很深。然后过几天就感觉细胞不行了。
有几个问题：
①.看文献上大家养肿瘤干细胞都是用的DMEM/F12,而我们的细胞原先的培养基是L15，突然换掉可以吗？因为按我自己的逻辑，干细胞无血清培养应该是L15+各种生长因子才对。
②. 板底部的东西到底是细胞碎片还是污染了呢？用的培养基都是我刚用滤膜滤过的，照理说不会污染。可是看网上有人说支原体污染的情形和我这个蛮类似的。

希望养过的大神们给我点建议，谢谢了！！！
所有金币全部奉上！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！

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