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Poppy-ly

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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专业: 园艺学与植物营养学

[交流] 求助大神帮忙算一下试剂量

GSH/GSSG含量测定
（1）提取：取0.5g材料，剪碎，置于预冷研钵中，加入预冷的质量分数为5%的磺基水杨酸6ml和少许石英砂，充分冰浴研磨。匀浆转入10ml离心管中，于4℃下20，000×g离心20min，将上清液分装，液氮冷冻后与-20℃保存或直接进行抗氧化分析。（与上同）
（2）GSSG含量测定：取200μl上清液，加入48μl 1.84mol/L三乙醇胺以中和样液，加入100μl 10%乙烯吡啶（用70%乙醇配制），25℃水浴1h，以除去GSH，到时加入1412 μl 50mmol/L磷酸缓冲液（pH7.5，内含25mmol/L EDTA），加入40μl 10mmol/L NADPH和160μl 12.5mmol/L DTNB（二硫硝基苯甲酸），混匀，25℃保温10min，到时加入40μl 50U/L GR。总体积为2ml，立即混匀，读出3min内412nm处OD值。
（3）总谷胱甘肽（GSSG+GSH）含量测定：将步骤（2）中的乙烯吡啶用等体积的蒸馏水替代即可。
GSH含量=总抗坏血酸含量－GSSG含量
（4）标准曲线制作：以质量分数为5%的磺基水杨酸为溶剂，用上述方法制作GSSG标准曲线。

发自小木虫IOS客户端

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