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各位大神好！最近快被酵母表达烦死！已经成功把蛋白片段的基因连接到ppic9k质粒上，测序也显示成功，然后电转化到酵母GS115中，提取酵母基因组用AOX1通用引物和蛋白片段特异性引物分别做pcr鉴定，均有条带，但是有一点不对劲，有文献上说用AOX1通用引物pcr鉴定时Mut+应该有两条条带，大的那条应该是酵母里面AOX1片段的，但是我没有，没有的话说明就是Muts表型，照理说应该也能诱导出蛋白，但是现在做了WB没有目的条带，还有用his标签镍柱纯化蛋白后没有目的条带，应该是没有诱导出蛋白，急死人了！我现在应该怎么做？是我诱导染菌了吗？因为酵母诱导产物好臭，但是我就是根据酵母诱导手册做的，用的BMGY和BMMY，但是诱导液臭臭的，需要加点amp防止染菌吗？还有就是我没有z用G418筛选高拷贝就直接诱导了，是因为这个原因吗？有大神做酵母表达蛋白的吗？求解啊！！！ 发自小木虫IOS客户端 |
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 蛋白表达纯化鉴定精华 |
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2楼2015-11-30 17:08:40