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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » PCR不成功
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小楚丶

新虫 (小有名气)

[求助] PCR不成功 已有2人参与

最近提取了河底底泥的DNA，但是用27F1492R这两对引物扩16S一直不成功，跑胶的条带都是杂的，哪位大神知道我可能在哪里出了问题么

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1楼 2015-11-14 21:03:38
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star013

新虫 (知名作家)
跟提取dna的质量有关

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2楼2015-11-22 09:45:56
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
好歹也传个图啊
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3楼2015-11-22 13:42:53
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binzaibinzai

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小楚丶: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-11-23 02:16:17
这个要考虑两方面的原因，第一个原因是DNA提取质量，领一方面是PCR反应程序和反应体系。首先可以建议你对样品进行稀释看看，是否是因为腐殖酸的影响，另外提取DNA的Ph值。另外不知道你的阴性阳性
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4楼2015-11-22 19:14:57
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371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

【答案】应助回帖

★ ★
小楚丶: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-11-23 02:16:37
也不知道你izuo了阴性阳性对照没，如果阴性阳性对照没问题就是DNA提取的可能性很大，这主要有DNA提取质量有关，DNA提取浓度很低，就做不出来。听你的描述，好多模糊条带，很有可能腐殖酸的干扰，建议你将模板稀释一下做做看。
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5楼2015-11-22 19:26:45
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小楚丶

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by binzaibinzai at 2015-11-22 19:14:57
这个要考虑两方面的原因，第一个原因是DNA提取质量，领一方面是PCR反应程序和反应体系。首先可以建议你对样品进行稀释看看，是否是因为腐殖酸的影响，另外提取DNA的Ph值。另外不知道你的阴性阳性

谢谢你，问题已经解决了，是DNA质量问题

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6楼2015-11-23 02:05:48
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小楚丶

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 371522029 at 2015-11-22 19:26:45
也不知道你izuo了阴性阳性对照没，如果阴性阳性对照没问题就是DNA提取的可能性很大，这主要有DNA提取质量有关，DNA提取浓度很低，就做不出来。听你的描述，好多模糊条带，很有可能腐殖酸的干扰，建议你将模板稀释一 ...

已经重新去除了腐植酸，PCR成功了哦，谢谢你

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7楼2015-11-23 02:06:38
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