测定细菌生长量，生长曲线绘制问题 - 微生物 - 培养/筛选

11楼2015-11-19 15:57:06

MarchZR

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细胞计数法绘制细胞生长曲线
基本操作
1.取生长良好的细胞，用胰蛋白酶消化，离心
2.离心后去上清，加入新鲜适量的培养基重悬细胞，使之成为单细胞悬液
3.按照一定的倍数稀释该单细胞悬液，稀释倍数以稀释结果细胞数在20-200之间为合适倍数
4.准备血球计数板，洗净晾干
5.吸取一定量的细胞悬液，加样到血球计数板上，显微镜下计数
6.按照血球计数板的计数原理进行细胞计数（参考细胞培养(http://www.detaibio.com/topics/cell-culture-faq.html)-血球计数板的原理）
7.计算细胞总数，调整细胞至一定浓度（1x105/ml）。细胞浓度=细胞计数板得到的细胞数量/4x稀释倍数x104/ml
8.细胞再培养，准备24孔板，每孔中加入0.1ml的细胞（即1x104个细胞）和0.9ml的细胞培养基，轻轻晃动孔板（十字方向晃动），使细胞分布均匀，并进行常规细胞培养（48h后换液培养）
9.培养48h后，即可每过24h取样一次，每次取样至少取3个孔的细胞，多次计数取平均值，提高准确性），取样细胞常规胰蛋白酶消化，制备单细胞悬液，显微镜下进行细胞计数
10.计数结果，以时间（d）为横坐标，细胞数为纵坐标，绘制细胞生长曲线
因为只是针对细胞，细胞还未开始瞬时表达，绘制生长曲线

12楼2015-11-27 16:39:32

微笑的鱼135

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10楼: Originally posted by zzulsylsy at 2015-11-19 13:43:26
我做乳酸菌，两种方法都用过：1、将斜面上的菌落用生理盐水全部冲洗下来后按一定的比例进行接种 2.有时直接将发酵液与甘油混合后冻干保藏到10ml的离心管中，每管含有一定体积的发酵液，直接用做好的甘油种子管按照 ...

在紫外光多少纳米呢，然后菌数与od的关系是什么

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13楼2016-04-11 14:30:38

微笑的鱼135

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可以留个联系方式吗，目前要做乳酸菌的生长曲线，有疑问，OD与菌密度关系，在多少纳米处测

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14楼2016-04-11 14:46:46

wonder0909

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每隔一定时间间隔测OD值，当初熬夜测得，每隔4或6h

15楼2016-04-11 21:06:31

阿芙佳朵

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我也用的第一种。

16楼2016-04-28 18:14:35

yaomanxiao

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将菌液按一定接种量接到液体培养基，每隔一定时间测OD

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17楼2016-04-30 08:34:38

请叫我学术帝

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5楼: Originally posted by crayoon at 2015-11-18 08:49:26
你说的这两种方法其实都可以。采用哪种方法，我觉得要看你以后培养过程中使用液体接种还是平板接种。如果以后培养接的摇瓶比较多，那用液体接种方便一些，如果摇瓶少，从平板接也比较方便。另外，我觉得液体接种平 ...

如果是摇瓶实验测生长曲线？每次取样都会消耗一部分，虽然少量，但是这样会不会影响最后的结果？如何规避呀？