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高-山-流-水

新虫 (初入文坛)

[交流] 测定细菌生长量,生长曲线绘制问题 已有15人参与

测定细菌生长量时,通常是将菌液加入到培养基中培养,每隔一定时间间隔测OD值,还是用接种环从固体培养基中挑取几环接入液体培养基中培养,再测OD值,大家都是怎么做的?谢谢!
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MarchZR

银虫 (小有名气)


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细胞计数法绘制细胞生长曲线
基本操作
1.取生长良好的细胞,用胰蛋白酶消化,离心
2.离心后去上清,加入新鲜适量的培养基重悬细胞,使之成为单细胞悬液
3.按照一定的倍数稀释该单细胞悬液,稀释倍数以稀释结果细胞数在20-200之间为合适倍数
4.准备血球计数板,洗净晾干
5.吸取一定量的细胞悬液,加样到血球计数板上,显微镜下计数
6.按照血球计数板的计数原理进行细胞计数(参考细胞培养(http://www.detaibio.com/topics/cell-culture-faq.html)-血球计数板的原理)
7.计算细胞总数, 调整细胞至一定浓度(1x105/ml)。细胞浓度=细胞计数板得到的细胞数量/4x稀释倍数x104/ml
8.细胞再培养,准备24孔板,每孔中加入0.1ml的细胞(即1x104个细胞)和0.9ml的细胞培养基,轻轻晃动孔板(十字方向晃动),使细胞分布均匀,并进行常规细胞培养(48h后换液培养)
9.培养48h后,即可每过24h取样一次,每次取样至少取3个孔的细胞,多次计数取平均值,提高准确性),取样细胞常规胰蛋白酶消化,制备单细胞悬液,显微镜下进行细胞计数
10.计数结果,以时间(d)为横坐标,细胞数为纵坐标,绘制细胞生长曲线
因为只是针对细胞,细胞还未开始瞬时表达,绘制生长曲线
12楼2015-11-27 16:39:32
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郑某某112

新虫 (小有名气)


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用液体培养基测od,每到一定的时间取出少量菌液测值,之后继续培养

发自小木虫Android客户端
2楼2015-11-14 22:10:55
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高-山-流-水

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 郑某某112 at 2015-11-14 22:10:55
用液体培养基测od,每到一定的时间取出少量菌液测值,之后继续培养

将培养后的菌液按一定比例接入液体培养基中培养,侧OD值?还是从平板上挑取几环接种到液体培养基中培养,测OD值?
3楼2015-11-14 22:51:19
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阿狸买卖猫

新虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们这边都是用全自动生长曲线分析仪测定72h的,每5min测定一次
做好当前的事~!
4楼2015-11-15 23:58:34
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