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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » TA克隆转化DH5α细胞后，涂板有菌落生长，但是挑斑之后摇菌怎么也摇不起来，
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51mimi

新虫 (小有名气)
那成功十之八九，你现在需要把后续用的器具，药品，培养基通通新制备，灭菌，注意避免污染问题。

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21楼2015-11-17 16:29:06
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alicelchf

木虫 (著名写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 瑷洱yd at 2015-11-17 14:13:58
用自己摇菌成功的菌液摇起来了，排除培养基和震荡摇床的问题了。...

我的意思空载体对照

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修身、齐家、治国、平天下
22楼2015-11-17 18:20:23
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heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
瑷洱yd: 金币+2, ★有帮助 2015-11-19 13:31:49
你这个平板是才配制的？不是的话放多久了啊？可以尝试先加300~400ul培养基，摇几个小时后，再取200ul转接到1ML培养基里面。
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23楼2015-11-18 14:40:25
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songjie851

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我做的跟楼主差不多，2ml离心管，1ml
培养基（已加amp,浓度与楼主一样），37度，转速100，14小时检测，没有任何问题。

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24楼2015-11-18 19:19:28
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by songjie851 at 2015-11-18 19:19:28
我做的跟楼主差不多，2ml离心管，1ml
培养基（已加amp,浓度与楼主一样），37度，转速100，14小时检测，没有任何问题。

14个小时，这么久啊？

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25楼2015-11-18 20:42:09
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by heianduck at 2015-11-18 14:40:25
你这个平板是才配制的？不是的话放多久了啊？可以尝试先加300~400ul培养基，摇几个小时后，再取200ul转接到1ML培养基里面。

今天请教博士师兄也是这么说的，感谢，我明天就试试，我的平板也是现配的，（一般头天配，第二天用）

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26楼2015-11-18 20:43:23
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 51mimi at 2015-11-17 16:29:06
那成功十之八九，你现在需要把后续用的器具，药品，培养基通通新制备，灭菌，注意避免污染问题。

恩，已经重新开始了

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27楼2015-11-18 20:44:15
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by alicelchf at 2015-11-17 18:20:23
我的意思空载体对照
...

没有做空载对照诶，明天做一个

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28楼2015-11-18 20:44:53
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songjie851

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
25楼: Originally posted by 瑷洱yd at 2015-11-18 20:42:09
14个小时，这么久啊？
...

也可以200微升培养基，摇5个小时后检测，有目的条带的再吸25微升菌液到1ml培养基里，再摇12个小时以上。这样比较省培养基。我只知道我这样做可以测序成功，是否时间太长不知道

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29楼2015-11-18 21:38:15
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angelyou

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉像是平板的抗生素失效~~~~ 你的平板是时间太久么 ？~~~~或者是加的时候培养基太烫了？~~
加抗生素的时候需要培养基稍微凉一些，不能太烫~~~~
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30楼2015-11-18 21:51:29
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