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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)

[交流] 请教大家的 连接体系都是怎么确定的

比如 一般 做多大的 体系    载体和目的 片段 的  量是怎么确定的  ,在已知 大小 和 浓度的情况下  ? 谢谢大家  我一般是 六微升的 体系 呵呵   最近连接一直不好
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shenye.judy

木虫 (正式写手)

用的是什么载体,片段多大?
2楼2008-09-11 11:12:35
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sonic8362

我用得也是12微升得体系
insert DNA  5微升
vector        1微升
ligationH     6微升
如果连接不好,你可以用agarose eletrophoresis跑一下,看看目的片段和载体比例,一般载体得浓度要比目的片段低很多,3-8倍样子,我最近在做克隆,最后酶切鉴定出成功连接得质粒比例很少,但我稀释了载体浓度后重新连接,这个比例明显提高。你可以试试看。
我是个新手还,希望大家多多交流啊
3楼2008-09-11 11:15:48
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)

就是 有啥 公式 之类的  呵呵 来确定 载体和 片段的 比例
4楼2008-09-11 15:47:30
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

目的片段与载体的摩尔比在:6:1~10:1.
5楼2008-09-11 15:49:40
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

一般摩尔浓度3:1 外源片段多一点  我们最少是十微升体系
6楼2008-09-12 09:36:34
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daniel867


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:47
我用的是12微升体系:

模板      5.5微升
vector      0.5微升
solutionI    6.0微升

连接效果挺好的。
7楼2008-09-12 11:14:31
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