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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教大家的 连接体系都是怎么确定的
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)

[交流] 请教大家的 连接体系都是怎么确定的

比如 一般 做多大的 体系    载体和目的 片段 的  量是怎么确定的  ，在已知 大小 和 浓度的情况下  ？ 谢谢大家  我一般是 六微升的 体系 呵呵   最近连接一直不好
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1楼 2008-09-10 23:39:45
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shenye.judy

木虫 (正式写手)
用的是什么载体，片段多大？
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2楼2008-09-11 11:12:35
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sonic8362

我用得也是12微升得体系
insert DNA  5微升
vector        1微升
ligationH     6微升
如果连接不好，你可以用agarose eletrophoresis跑一下，看看目的片段和载体比例，一般载体得浓度要比目的片段低很多，3-8倍样子，我最近在做克隆，最后酶切鉴定出成功连接得质粒比例很少，但我稀释了载体浓度后重新连接，这个比例明显提高。你可以试试看。
我是个新手还，希望大家多多交流啊
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3楼2008-09-11 11:15:48
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xuguang09280036

新虫 (初入文坛)
就是 有啥 公式 之类的  呵呵 来确定 载体和 片段的 比例
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4楼2008-09-11 15:47:30
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
目的片段与载体的摩尔比在：6：1~10：1.
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5楼2008-09-11 15:49:40
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
一般摩尔浓度3:1 外源片段多一点  我们最少是十微升体系
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6楼2008-09-12 09:36:34
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daniel867

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-13 05:47
我用的是12微升体系：

模板      5.5微升
vector      0.5微升
solutionI    6.0微升

连接效果挺好的。
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7楼2008-09-12 11:14:31
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