24小时热门版块排行榜    

查看: 3202  |  回复: 14

1045344165

金虫 (正式写手)

11楼2015-11-03 23:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bright8

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
双酶切没有切好,只要质粒切好,就能链接上了,另外片段:载体=7:1,空载会少一些。

发自小木虫Android客户端
12楼2015-11-04 07:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w_goodluck

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼上说的都是挺好的。看楼主应该是被困扰时间挺长了,说明做了不少次。有些特殊情况下,某些片段的确很难和载体连接,我们做实验时候碰到过多次。比较好的解决办法是,在转化平板上长出来的菌落,用菌落PCR来筛选阳性菌落,做好一次筛选上四五十个,做上一两次就可以筛选到了。

发自小木虫Android客户端
13楼2015-11-04 08:36:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by keke226 at 2015-11-03 16:27:38
载体自连太多的话可以在酶切后用碱性磷酸酶处理一下,降低连接时载体的自连率。另外,为了确认载体是否完全被切开了,可以把酶切后的载体做一次转化做个对照即可。
...

正解也!
14楼2015-11-06 11:21:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maxiaoliangx

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by wxb2061 at 2015-11-03 14:31:28
空载的载体酶切真心不好确认,我得是ndel和hindlll位点,跑胶根本看不到,现在正在做,前一次就是连不上,菌落都是一丁点的样子,一看就不是连接上的菌,我转化是dh5a,同样28a载体。下午转化,自求多福啊!
...

额···   这个,你是怎么通过菌落看出来有没有连上菌的?是因为菌落长得少么?我昨天做个转化,今天早上看板子上菌落就特别少,这种情况是要废么?
15楼2015-11-22 09:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lchxs465 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见