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xl0417

铁虫 (初入文坛)

[求助] 细胞融合 已有4人参与

细胞融合之后用HAT培养液一般用多久就换成HT？
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1楼 2015-11-02 09:28:23
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legendxie

铜虫 (初入文坛)
2周左右
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happyeachday
2楼2015-11-05 09:38:29
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langzian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

7天足矣！长了浪费时间啊！

发自小木虫Android客户端
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江山
3楼2015-11-10 00:45:25
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蓝洋飘雪

木虫 (小有名气)
您好，我也在做细胞融合，不知您能否告诉我，您融合时的步骤是怎样的？我们融合了6-7次，都失败了。PEG用量和PH值是关键吗？
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人生如茶，不会苦一辈子，但会苦一阵子！
4楼2015-12-02 11:28:47
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crystal1243

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 蓝洋飘雪 at 2015-12-02 11:28:47
您好，我也在做细胞融合，不知您能否告诉我，您融合时的步骤是怎样的？我们融合了6-7次，都失败了。PEG用量和PH值是关键吗？

融合过程需要在37度水浴环境中融合。用的是50%PEG。
过程大概是：
第一分钟逐滴滴入PEG。第二分钟加入lml培养基，（一定要在一分钟内缓慢的加入，并且要不断的轻轻晃动，切忌加入速度过快）第3~4分钟加3ml培养基，第5分钟加其余的5ml，每次加时需缓慢加入，并不断轻轻地晃动。最后加入30ml培养基，也需慢慢加入。
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5楼2016-01-07 20:16:10
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wudouzi123

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们做的一般第5天半量换液的时候就换成HT培养基了。
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6楼2016-01-12 14:45:21
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longqingci

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不用很死板，只要杂交瘤长出，且未融合上的细胞凋亡掉，即可，一般6-12天都可以，太短了换液可能会打散为长好的集落而影响杂交瘤生长，时间太长没有营养，细胞也会死亡。所以还是要根据实验情况来定。中间时间，多数是看你血清的优良状态，如果血清质量好，可能杂交瘤生长快些，就需要及时换液。本人在实际操作中，HAT直接换成普通培养基，不经过HT也是可以的。
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7楼2016-07-01 17:11:09
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